【摘 要】
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目的:构建可溶性表达PTD4-apoptin、R9-apoptin、hC-SOD3-apoptin三种融合蛋白的原核表达载体,检测其对Hela癌细胞的凋亡作用,并筛选出抑制效果最强的,具有高活性和强细胞渗
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目的:构建可溶性表达PTD4-apoptin、R9-apoptin、hC-SOD3-apoptin三种融合蛋白的原核表达载体,检测其对Hela癌细胞的凋亡作用,并筛选出抑制效果最强的,具有高活性和强细胞渗透性的穿膜肽-apoptin。方法:选用pGEX-6p-1质粒,构建pGEX-6p-1-PTD4-apoptin、pGEX-6p-1-R9-apoptin和pGEX-6p-1-hC-SOD3-apoptin原核表达载体,使三种表达载体在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中表达。经IPTG诱导表达,GST亲和层析柱、超滤管浓缩纯化后,得到高浓度的融合蛋白。与Hela细胞共同孵育,通过MTT检测PTD4-apoptin、R9-apoptin和hC-SOD3-apoptin三种融合蛋白对Hela细胞的凋亡作用。结果:成功构建PTD4-apoptin、hC-SOD3-apoptin和R9-apoptin的可溶性表达融合蛋白,并在大肠杆菌转化,经纯化后的得到高浓度融合蛋白,与Hela癌细胞共同孵育,PTD4-apoptin、hC-SOD3-apoptin和R9-apoptin三种融合蛋白具有促进Hela癌细胞凋亡的作用。PTD4-apoptin对Hela细胞的抑制率82.34%,hC-SOD3-apoptin对Hela细胞的抑制率66.60%,R9-apoptin对Hela细胞的抑制率45.03%。结论:成功表达了PTD4-apoptin、R9-apoptin、hC-SOD3-apoptin三种可溶性融合蛋白,并且对Hela癌细胞有抑制作用。
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