研究目的以慢性不可预见性温和刺激(Chronic Unpredictable Mild Stress,CUMS)诱导抑郁小鼠为基础,结合选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(Selective Serotonin Reuptake Inhibitor,SSRI)类经典药物——盐酸氟西汀(Fluoxetine Hydrochloride,FLX)及抑郁样行为评估手段的使用,筛选出对氟西汀不敏感的小鼠以模拟临床难治性抑郁(Treatment-Resistant Depression,TRD)患者的症状表现。在此模型基础上,观察小鼠抑郁样行为表现和脑内白介素-1β(Interleukin-1 beta,IL-1β)、白细胞介素1受体拮抗剂(Interleukin-1 Receptor Antagonist,IL-1RA)以及核因子-κB(Nuclear Factor-κB,NF-κB)的表达水平,并对其抑郁样行为与IL-1β表达水平之间做出统计学相关分析。以初步探讨IL-1β与难治性抑郁之间的关系,为难治性抑郁的发病机制研究及临床治疗方向提供新思路与理论基础。研究方法本研究中实验分为两部分,均为基础实验:第1部分:50只成年雄性BALB/c小鼠适应性饲养1周后,随机分为对照组(CONTROL)、模型组(CUMS)和模型+治疗(CUMS+Treatment)组。对照组接受常规饲养9周,模型组接受CUMS处理9周,而模型+治疗组接受8周CUMS处理和1周盐酸氟西汀10mg/kg/day干预。分别于第8、9周末,对各组小鼠进行体质量(Body Weight Test,BWT)、强迫游泳(Forced Swim Test,FST)、糖水偏好(Sucrose Preference Test,SPT)及旷场测试(Open Field Test,OFT),获取并对比两次评估结果差异。以治疗后小鼠在糖水偏好实验中测得糖水偏好系数的增加量为标准,定义出抑郁样行为减轻小鼠为“治疗有效/一般抑郁小鼠(Depressed Mice,DM)”和“氟西汀不敏感/治疗抵抗小鼠(Anti-Fluoxetine Mice,FRM/Anti-depressant Resistant Mice,ATRM)”。在此分组基础上,利用SPSS19.0软件分析第9周结束时对照组、模型组、一般抑郁小鼠以及氟西汀不敏感组小鼠在上述行为学测试中的测试结果,比较组间差异。第2部分:在第9周结束时,处死各组小鼠,提取脑组织,借助免疫蛋白印迹检测(Western Blot,WB)与酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)技术对组织中IL-1β、IL-1RA以及NF-κB的表达水平进行分析,并使用统计软件对比分析组间差异。结果第1部分:(1)体质量检测:第9周结束时,对照组小鼠体质量为(24.56±5.45)g,模型组为(19.03±8.58)g,症状改善组小鼠体质量为(20.12±9.17)g,治疗抵抗组小鼠为(18.56±7.56)g。其中,治疗抵抗组小鼠体质量较对照组、治疗有效组小鼠体重下降明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)糖水偏好实验:在第8周末,对照组小鼠的糖水偏好值为74%,模型组小鼠糖水偏好58%,治疗有效组为52%,治疗抵抗组为50%。而第9周末,对照组小鼠糖水偏好值为76%,模型组为48%,治疗有效组为64%,治疗抵抗组为53%。氟西汀干预后,治疗抵抗组小鼠糖水偏好值上升幅度较小,仍低于对照组与治疗有效组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)第9周末,旷场试验中各组小鼠水平运动距离的组间比较结果中,对照组小鼠为(1471.61±1573.65)mm,模型组小鼠为(819.71±874.15)mm,治疗有效组小鼠为(1017.82±910.98)mm,治疗抵抗组小鼠为(1049.07±620.02)mm。进行统计学分析后发现,组间差异不具有统计学意义。在强迫游泳行为学评估中,对照组小鼠不动时间为(208.25±13.20)s,模型组为(238.50±13.38)s,治疗有效组小鼠为(156.00±25.47)s,治疗抵抗组小鼠不动时间为(241.50±36.55)s。其中,模型组与治疗抵抗组小鼠的强迫游泳不动时间较对照组明显延长。进行组间比较发现,治疗抵抗组小鼠强迫游泳不动时间分别与对照组、治疗有效组小鼠不动时间存在差异,差异具有统计学意义(P<0.01)。第2部分:(1)Western Blot:IL-1β——模型组、治疗有效组及治疗抵抗组小鼠蛋白表达水平均较对照组表达水平较高,其中模型组与治疗抵抗组升高较为明显,但各组间IL-1β/β-actin的表达差异没有统计学意义(F=0.643,P=0.719);IL-1RA——模型组、治疗有效组及治疗抵抗组小鼠IL-1RA蛋白表达水平均有所升高。将各组IL-1RA/β-actin进行组间比较后发现,治疗抵抗组分别高于模型组、治疗有效组IL-1RA的表达水平,差异具有统计学意义(F=38.246,P<0.001;F=32.459,P<0.001)。NF-κB——模型组、治疗有效组及治疗抵抗组小鼠脑内NF-κB蛋白表达水平均较对照组表达水平较高。其中模型组与治疗抵抗组升高较为明显,但表现为趋势,将各组小鼠NF-κB/β-actin进行两两比较后,差异不具有统计学意义(F=0.726,P=0.851)。模型组、治疗有效组及治疗抵抗组小鼠脑内NF-κB蛋白表达水平均较对照组表达水平较高。其中模型组与治疗抵抗组升高较为明显,但表现为趋势,将各组小鼠NF-κB/β-actin进行两两比较后,差异不具有统计学意义(F=0.726,P=0.851)。(2)ELISA检测:对照组小鼠脑内IL-1β含量为(72.94±1.44)pg/mg,模型组为(177.978±1.952)pg/mg,治疗有效组为(93.09±4.65)pg/mg,治疗抵抗组为(164.90±46.70)pg/mg。其中,治疗抵抗组小鼠脑内IL-1β水平升高明显,与对照组、治疗有效组进行比较,差异具有统计学意义。(3)治疗抵抗组小鼠脑内IL-1β水平与强迫游泳不动时间间的相关分析:IL-1β的升高与强迫游泳不动时间呈显著正相关(r2=0.459,P=0.006)。结论8周的慢性不可预见性温和刺激模型可以诱导小鼠出现明显抑郁样行为改变,使用盐酸氟西汀以及抑郁样行为评估实验可以帮助筛选出对氟西汀治疗不敏感的抑郁小鼠,在一定程度上模拟临床难治性抑郁症发作时症状难以改善的特点。治疗抵抗小鼠表现出异常增高的IL-1β、IL-1RA及NF-κB水平,其中IL-1β水平与强迫游泳中不动时间呈正相关关系。提示IL-1β在难治性抑郁的发病过程中可能与抑郁症状严重程度有关。