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目的:体外培养人卵巢癌细胞SKOV3,诱导筛选出顺铂耐药细胞SKOV3/DDP。研究稀土氯化镧对人卵巢癌DDP耐药细胞是否有逆转作用,并初步探讨其相关机制。方法:1、以低浓度DDP逐渐递增,诱导卵巢癌顺铂耐药细胞SKOV3/DDP,倒置显微镜下观察两株细胞形态学的差别,用CCK8法测定DDP(1、2、4、6、8、16、32μg/ml)对SKOV3细胞及SKOV3/DDP细胞的生长抑制率,分别得出IC50,计算得到耐药细胞的耐药指数。2、CCK8法检测以一定浓度梯度氯化镧作用36、48h后对SKOV3/DDP细胞的增殖活力影响,并选取生长抑制率小于5%浓度为相对无细胞毒性氯化镧浓度;CCK8法检测无细胞毒性浓度的氯化镧与DDP(1、2、4、6、8、16、32μg/ml)联用对SKOV3/DDP细胞的生长抑制率,比较联合用药与单用DDP作用的IC50。3、实验设四组:空白对照组、单独氯化镧10μg/ml组、单独DDP5μg/ml组、氯化镧10μg/ml+DDP5μg/ml组。用克隆形成实验检测不同实验组SKOV3/DDP细胞的克隆形成能力,以流式细胞术检测不同实验组SKOV3/DDP细胞凋亡率。Western blot检测不同实验组SKOV3/DDP细胞内Caspase-3、ERCC1蛋白的表达水平。结果:1、成功诱导SKOV3耐DDP细胞,其能够在1μg/ml DDP中生长良好。SKOV3/DDP细胞较SKOV3细胞生长缓慢。倒置显微镜下观察SKOV3细胞株形态呈鹅卵石样,大小一致,形态规则;SKOV3/DDP细胞株呈长形梭形,相对扁平,多角,折光性稍差。2、SKOV3/DDP细胞相对SKOV3细胞具有一定耐药性,耐药指数RI为2.09倍。不同浓度DDP处理SKOV3细胞和SKOV3/DDP细胞24h,DDP对SKOV3的IC50为4.96μg/ml,对SKOV3/DDP细胞的IC50为10.37μg/ml。3、氯化镧(10~320μg/ml)能抑制skov3/ddp细胞的体外增殖,10μg/ml氯化镧对skov3/ddp生长抑制率小于5%,无直接细胞毒作用,以10μg/ml氯化镧作为后续研究耐药逆转的浓度;氯化镧浓度(≤10μg/ml)时随着时间增加抑制率上升不显著,差异无统计学意义。在较高浓度氯化镧作用时,呈现一定的浓度和时间依赖性。4、10μg/ml氯化镧和ddp联合作用可增强ddp对skov3/ddp细胞的细胞毒作用。10μg/ml氯化镧联合不同浓度的ddp作用24h,ddp对skov3/ddp细胞的ic50为7.25μg/ml;而单用ddp刺激24h的ic50为10.37μg/m。5、克隆形成实验:10μg/ml氯化镧和ddp联合作用能有效抑制skov3/ddp细胞克隆形成。空白对照组、单用氯化镧10μg/ml组、单用ddp5μg/ml组、ddp5μg/ml+氯化镧10μg/ml组克隆形成率分别为(11.20±0.52)%、(8.73±0.50)%、(0.96±0.15)%、0;且ddp5μg/ml组、ddp5μg/ml+氯化镧10μg/ml组跟空白对照组相比skov3/ddp细胞量减少。6、流式细胞术测细胞凋亡:10μg/ml氯化镧和ddp联合作用能增加skov3/ddp细胞凋亡。空白对照组、单用氯化镧10μg/ml组、单用ddp5μg/ml组、ddp5μg/ml+氯化镧10μg/ml组,其凋亡率分别为19.2%、23.5%、29.1%、39.2%。单用ddp5μg/ml组与空白对照组比较,凋亡率上升。单用氯化镧10μg/ml组与空白对照组比较,凋亡率上升不明显。ddp5μg/ml+氯化镧10μg/ml组与单用ddp5μg/ml组比较凋亡率明显上升。7、skov3/ddp细胞中caspase-3、ercc1蛋白表达水平测定:氯化镧10μg/ml+ddp5μg/ml联合用药与单独ddp5μg/ml组比较,ercc1蛋白表达减少,活化caspase-3蛋白表达增加,差异有统计学意义。在skov3/ddp细胞中,单用ddp5μg/ml组,ercc1蛋白表达上调;ddp5μg/ml+氯化镧10μg/ml组,ercc1蛋白的表达明显下调;两组分别与空白对照组比较均有显著差异(p<0.05),两组间比较差异有显著性(p<0.05);单用ddp5μg/ml组,活化caspase-3蛋白表达与空白对照组比,表达有上调,差异有统计学意义(p<0.05);ddp5μg/ml+氯化镧10μg/ml组,活化caspase-3蛋白的表达明显上调,差异有统计学意义(p<0.05);ddp5μg/ml+氯化镧10μg/ml组与单独ddp组比较,活化caspase-3蛋白的表达增加,差异有显著性(p<0.05)。结论:1、从低剂量DDP逐渐递增能够诱导具有一定耐药性的SKOV3/DDP细胞。2、一定浓度氯化镧对SKOV3/DDP细胞有增殖抑制作用,并且低剂量无直接细胞毒性氯化镧能够增加SKOV3/DDP细胞对DDP的敏感性。3、DDP作用于卵巢癌耐药细胞时,ERCC1蛋白表达上调。当同时予无直接细胞毒性浓度氯化镧,即可抑制ERCC1蛋白的表达上调,阻断ERCC1基因的DNA修复功能,使SKOV3/DDP细胞Caspase-3蛋白活化增加,细胞凋亡增加。