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目的观察大鼠脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)模型脑组织自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、Beclin1和核因子-κB(nuclear factor-κappa B,NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)的变化,以探讨自噬对脑出血大鼠脑组织神经元细胞继发性炎症损伤的影响及3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3MA)干预作用,进而探讨抑制自噬对脑出血大鼠的保护作用及可能机制。方法1模型制备及分组:实验采用自体新鲜不抗凝血液注入大鼠右侧大脑基底节区建立ICH模型。成年雄性SD大鼠180只,随机分为如下三组:假手术组(Sham组);脑出血模型组(ICH模型组):采用自体新鲜不抗凝血液注入大鼠右侧基底节区制作ICH模型;脑出血模型+抑制剂干预组(ICH+3MA组):于脑出血造模前15min给予3MA腹腔注射5mg/kg,随后每日注射一次。每组按不同时间点(0.5d、1d、2d、3d、5d)又分为五个亚组。2检测指标及方法:应用Longa评分法对大鼠进行行为学评分;采用苏木精-伊红染色(HE染色)法观察脑组织病理学变化;采用尼氏染色显微镜下观察脑组织病理学变化并进行未受损神经元计数;应用干-湿重法测脑组织含水量;采用透射电镜观察脑组织细胞超细微结构自噬小体的发生;应用免疫荧光共聚焦检测NF-κB分别与TNF-α、LC3、Beclin1表达定位;通过免疫组织化学法检测LC3、Beclin 1、NF-κB、TNF-α阳性表达;应用免疫蛋白印记(Western Blot)法检测Beclin 1、NF-κB、TNF-α的蛋白表达量。结果1与Sham组相比,ICH模型组与ICH+3MA组大鼠神经学评分显著增高(P<0.05),在各观察时间点均出现不同程度的活动减少、反应迟钝、肢体活动不灵活甚至瘫痪等功能缺失现象,与ICH模型组相比,3MA干预后大鼠神经学评分降低(P<0.05)。2 HE染色光镜下观察,Sham组大鼠脑组织结构完整,细胞无明显的病理变化,细胞核边际清晰,排列整齐。ICH模型组与ICH+3MA组脑组织出血血肿周围水肿,神经细胞肿胀,胞核固缩或碎裂,部分神经细胞坏死、消失,细胞间隙明显变大。3尼氏染色光镜下观察,与Sham组相比,ICH组大鼠脑组织内神经细胞胞间隙变大,胞体收缩,尼氏小体明显丢失(P<0.05),3MA干预后神经细胞尼氏小体丢失现象明显改善(P<0.05)。4脑组织含水量测定,Sham组脑组织含水量在各观察时点基本一致,未发生脑水肿。ICH模型组与ICH+3MA组术后0.5d即开始增高,并随时间的推移逐渐增加,与Sham组比较,各时间点差异具有统计学意义(P<0.05);与ICH模型组相比,3MA干预后各时间点脑组织水含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。5透射电镜观察,可见ICH模型组与ICH+3MA组自噬小体较Sham组明显增加。6免疫荧光共聚焦结果显示,NF-κB与TNF-α、LC3、Beclin1可分别共定位。7免疫组织化学结果显示,Sham组中LC3、Beclin1、NF-κB、TNF-α仅能检测到微弱阳性表达,并且各时间点表达均没有显著变化;与Sham组相比,ICH模型组与ICH+3MA组的LC3、Beclin1、NF-κB、TNF-α蛋白的表达均有显著的变化。ICH模型组中LC3、Beclin1从0.5d开始阳性表达明显上升,1d达高峰,并可持续至3d,随后逐渐下降;NF-κB、TNF-α蛋白的阳性表达随时间的变化呈逐渐上升的趋势,3d达高峰,随后下降;3MA干预后,LC3、Beclin1、NF-κB、TNF-α趋势与ICH模型组一致,但阳性表达降低。8免疫蛋白印记检测结果显示,Sham组中Beclin1、NF-κB、TNF-α含量较低,处于生理水平。与Sham组相比,ICH模型组NF-κB蛋白表达量明显增加,3MA干预后NF-κB表达量减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。与Sham组相比,ICH模型组TNF-α蛋白表达量明显增加,3MA干预后TNF-α表达量减少,差异具有统计学意义(P<0.05),TNF-α变化趋势与NF-κB基本一致。与Sham组相比,ICH模型组Beclin1蛋白表达量明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。3MA干预后Beclin1含量减少,与ICH模型组相比,Beclin1蛋白表达量明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论1自噬可能参与了大鼠脑出血基底节区周围脑组织神经元的继发性炎症损伤过程。2继发性损伤早期,脑组织神经元自噬激活可加重NF-κB介导的炎症反应,进一步上调TNF-α引起炎症损伤。3自噬抑制剂3MA可抑制自噬活性降低脑组织神经元细胞继发性炎症反应,从而减轻脑损伤。图16幅;表3个;参143篇。