论文部分内容阅读
目的通过对AS患者PBMC中5种微小RNA(micro-RNA,mi RNAs)表达量的检测,筛选出差异性表达的mi RNAs。探讨mi RNAs是否可以作为AS患者潜在的诊断标志物,并对mi R-495在DVL-2蛋白表达中的调控作用进行研究。方法1.利用mi Randa、Star Base等生物信息学软件,筛选与AS致病密切相关的mi RNAs。并利用Real-time PCR方法对临床61例AS患者和31例健康者PBMC中mi R-17、mi R-106、mi R-181、mi R-495和mi R-30的表达情况进行检测,同时利用统计软件对实验结果进行分析,筛选可以作为AS诊断潜在生物标志物的mi RNAs。2.利用mi Randa、Star Base等生物信息学软件,以AS患者PBMC中表达量具有显著性差异的mi R-495为研究对象,对其潜在的靶基因进行预测。通过双荧光素酶报告基因系统及Western-Blot实验验证mi R-495与DVL-2的靶向关系。3.应用ELISA对28例AS患者和14例健康者血浆中的DVL-2蛋白量进行检测,研究AS患者PBMC中mi R-495的表达量与血浆中DVL-2蛋白水平的相关性以及mi R-495通过靶向抑制DVL-2蛋白调控AS发病机制。结果1.在AS患者PBMC中表达上调的有mi R-106与mi R-30;表达下调mi R-181(p<0.05)、mi R-495(p<0.05)和mi R-17。并分别对mi R-181和mi R-495作为临床诊断进行ROC曲线分析,其中mi R-181的AUG为0.697,敏感性达76.67%,特异性达54.84%,正确性为68.48%。通过对结果的分析,我们认为mi R-181对临床诊断参考价值较低;而mi R-495的AUG为0.729,敏感性达92.23%,特异性达58.06%,正确性为86.9%。结果表明,mi R-495有望成为AS疾病潜在的诊断标志物。2.预测结果表明mi R-495可以靶向作用于DVL-2基因。双荧光素酶报告结果表明:过表达mi R-495可抑制DVL-2的相对荧光素酶活性;相反抑制mi R-495可增加DVL-2的相对荧光活性。Western-Blot结果表明:过表达mi R-495可抑制DVL-2蛋白表达量;而抑制表达mi R-495可促进DVL-2蛋白的表达。由此我们认为mi R-495可以靶向抑制DVL-2。3.进一步通过ELISA方法检测临床样本血浆中DVL-2的表达情况,在AS患者中DVL-2的表达量明显增高。并联合PBMC中mi R-495的表达量与血浆中DVL-2蛋白的表达量进行相关性分析,结果表明mi R-495与DVL-2呈负相关,进一步说明mi R-495可靶向抑制DVL蛋白的表达并参与AS发病机制的调控。结论1.PBMC中mi R-495的表达水平,对AS疾病的临床诊断具有参考意义,有望成为AS疾病潜在的诊断标志物。2.mi R-495可以靶向调节Wnt通路中的关键蛋白DVL-2的表达,在AS疾病中起到调节作用。