食品中有机磷农药和真菌毒素的荧光检测方法研究

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近年来,食品安全事件频出,其中有机磷农药(OPs)残留和真菌毒素污染问题一直是最主要的两大安全隐患。有机磷农药由于其高效的杀虫除草性能,已被广泛运用于现代农业生产中,但部分农民对农药的不合理使用和滥用造成了农产品中农药残留超标现象,带来食品安全与环境污染危害。真菌毒素是由真菌在农作物中生长而产生的次级代谢产物。人类与动物误食被真菌毒素污染的食品后,存在致癌、致畸风险。据联合国粮农组织统计,全球每年约四分之一的粮食作物受到不同程度的污染,造成惨重的经济损失和安全隐患。其中,婴幼儿食品中真菌毒素超标问题引起了社会广泛关注。由于受众人群的特殊性,婴幼儿食品的各项安全质量指标更为严格。因此,探索灵敏、精准、高效的真菌毒素和有机磷农药检测方法具有重要意义。本论文基于荧光检测方法,实现了对毒死蜱和四种真菌毒素的灵敏检测,具体内容如下:(1)基于碱性磷酸酶(ALP)触发的荧光反应和酶抑制机理,构建了一种荧光传感器,实现了对毒死蜱的灵敏检测。ALP能催化底物L-抗坏血酸-2-磷酸盐倍半镁盐水合物(AAP)的去磷酸化,生成抗坏血酸(AA)。AA与邻苯二胺(OPD)能够发生反应,生成含有喹喔啉荧光团的新物质,因此溶液在425 nm处具有明显的荧光信号。当向体系中加入有机磷农药后,酶的活性降低,荧光物质产量减少,从而导致溶液荧光强度明显降低。该方法对毒死蜱的检测范围为20 pg/m L-1000 ng/m L,检出限为15.03 pg/m L(S/N=3)。本方法具有优异的准确度,已成功应用于蔬菜样品中毒死蜱的检测。此外,本实验成本低,操作简单,没有繁琐的荧光标记步骤,而且可通过紫外灯下溶液颜色的变化进行简单的定性判断。(2)构建了一种固相免疫芯片实现了对黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素M1、玉米赤霉烯酮、伏马菌素B1(AFB1、AFM1、ZEN、FB1)的同时检测。通过量子点(QD)标记真菌毒素的完全抗原(Ag-BSA)制备量子点-抗原偶联物(Ag-BSA-QD),选用硝酸纤维素膜(NC膜)为载体,在其表面固定四种真菌毒素的单克隆抗体,然后加入相应的真菌毒素和Ag-BSA-QD的混合液,形成直接竞争模式。通过抗原抗体间的特异性免疫反应,固相芯片能够捕获到量子点,再利用微流控芯片分析仪对各检测孔的荧光信号进行采集,以达到高通量同时检测的目的。本方法可在1分钟内对32个样品进行精确测定,对AFB1、AFM1、ZEN、FB1的检测线性范围分别为0.01-10 ng/m L、0.1-100 ng/m L、1-200 ng/m L、10-500 ng/m L,并已初步应用于婴幼儿奶粉样品的检测中。与其它真菌毒素检测方法相比,所提出的固相芯片法只需通过一步免疫反应即可完成,更高效简单,同时也为食品中其它有害物质(如农兽药、激素等)的测定提供新的研究策略。
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