ERα特异性抑制剂对小鼠植入前胚体外发育和合子基因组激活的影响

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目的:观察雌激素受体(estrogen receptor,ER)抑制剂(ICI182780)、ERα特异性抑制剂(MPP)和ERβ特异性抑制剂(PHTPP)以及ERα特异性抗体对小鼠植入前胚体外发育的影响;探讨ERα特异性抑制剂(MPP)对小鼠合子基因组激活(zygotic genome activation,ZGA)中四个相关基因,以及ERα目的基因c-Myc的表达影响,为进一步阐明ERα在小鼠植入前胚发育中的作用奠定基础。方法:1、分别取KM雌性小鼠与KM雄性小鼠(♀KM×♂KM),以及B6C3F1雌性小鼠与KM雄性小鼠(♀B6C3F1×♂KM)交配所得的1-细胞胚和2-细胞胚,观察其在M16培养液、不同浓度的ICI182780培养液、不同浓度的MPP培养液、不同浓度的PHTPP培养液以及不同浓度的ERα特异性抗体培养液中体外发育的情况;2、收集KM小鼠1-细胞胚,分别置于M16和含MPP(25μΜ)的培养液中培养,获取体外发育的2-细胞胚:⑴激光共聚焦扫描显微镜观察胚内核ERα定位和表达情况;⑵Western-blot检测ERα、c-MYC蛋白水平;⑶Realtime-PCR测定ERα、c-Myc、Jmjd2c、MuERV-L、Zscan4d、Hsp70.1和eIF1AmRNA水平。结果:1、ER抑制剂(ICI182780)、ERα特异性抑制剂(MPP)和ERα特异性抗体使小鼠1-细胞胚和2-细胞胚体外发育受阻于2-细胞阶段,很少能过渡至4-细胞胚;而ERβ特异性抑制剂(PHTPP)无上述作用;2、激光共聚焦扫描显微镜显示,MPP组中,核ERα荧光相对强度低于M16组(P<0.01);3、Western blot检测表明,MPP组和M16组中,ERα、c-MYC蛋白表达水平没有明显差异,不具有统计学意义(P>0.05);4、Realtime-PCR结果提示,MPP组中,MuERV-L mRNA水平明显低于M16组(P<0.01),而其他基因mRNA水平与M16组比较,没有明显差别(P>0.05)。结论:ER抑制剂(ICI182780)、ERα特异性抑制剂(MPP)和ERα特异性抗体对小鼠植入前胚2-细胞至4-细胞体外发育过渡具有抑制作用,进而使植入前胚无法发育至囊胚阶段,而ERβ特异性抑制剂(PHTPP)对其抑制效果不明显,提示ERα在小鼠植入前胚2-细胞至4-细胞体外发育过渡中的作用;ERα特异性抑制剂使合子基因组激活相关基因MuERV-L mRNA表达水平下调,提示ERα可能是通过影响与ZGA相关基因的表达水平来发挥其在合子基因组激活中的作用。
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