bFGF诱导移植神经干细胞在损伤脊髓内分化的研究

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目的:①脊髓神经干细胞(NSCs)的分离培养并鉴定;②大鼠脊髓损伤(SCI)模型的制作;③观察SCI后bFGF表达变化,及外源性bFGF对脊髓损伤的治疗作用,探讨bFGF在SCI后的生物学效应;④SCI后NSCs移植,探讨NSCs在损伤脊髓内的生物学特性,及bFGF对其诱导作用。方法:①脊髓NSCs的培养和鉴定由福建医科大学分子生物中心完成;②SD大鼠80只,雌雄不限,随机分成10组(n=8):假手术组、SCI后2,5,12,18,30和42天组,脊髓损伤神经干细胞移植组,脊髓损伤bFGF治疗组,脊髓损伤神经干细胞移植联合bFGF治疗组(综合治疗组);③Allen法建立大鼠SCI模型;④损伤后每两天用Gale联合评分法(the combine behavioral score , CBS)检测脊髓损伤大鼠行为改变;⑤免疫组化染色,检测SCI后内源性bFGF表达;⑥利用立体定位技术在脊髓损伤部位移植体外BrdU标记的NSCs,并通过侧脑室埋管给予bFGF。饲养6周后取脊髓,行免疫荧光组织化学方法,观察NSCs的存活、分化等情况。结果:①从新生大鼠脊髓分离的细胞群具有连续克隆能力,表达Nestin蛋白,并能在体外分化成神经元、星型胶质细胞;②SCI后2-6周,综合治疗组与脊髓损伤组相比功能有明显恢复(P<0.05);SCI后6周内,脊髓损伤神经干细胞移植组与脊髓损伤组相比,综合治疗组与脊髓损伤bFGF治疗组相比,功能恢复无明显差异;③SCI后bFGF的表达进行性增加,在18天已开始下降;④BrdU标记的NSCs移植入SCI大鼠脊髓后6周,能存活并向周围迁移,移植细胞大部分保持在未分化状态;综合治疗组内可见BrdU与 GFAP双阳性细胞。在两组中均未见到BrdU与MAP2、CNP双阳性细胞。结论:①从新生大鼠脊髓中分离培养的细胞是NSCs;②bFGF对损伤脊髓的再生和修复起重要作用;③神经干细胞在损伤脊髓微环境内能存活,并向周围迁移;bFGF能诱导NSCs分化为星形胶质细胞;④SCI后6周,NSCs移植对SCI没有明显治疗作用。
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