【摘 要】
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肾细胞癌（renal cell carcinoma,RCC）是泌尿系统恶性肿瘤之一,近些年来其发病率呈现上升趋势。肾透明细胞癌（celar cell RCC,ccRCC）是RCC中最常见的一个亚型,占所有RCC病例的75%。细胞周期蛋白依赖性激酶3（cyclin dependent kinase 3,CDK3）属于CDK家族,在细胞周期的调节中发挥重要作用。新近研究发现,CDK3蛋白水平在部分癌组
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肾细胞癌（renal cell carcinoma,RCC）是泌尿系统恶性肿瘤之一,近些年来其发病率呈现上升趋势。肾透明细胞癌（celar cell RCC,ccRCC）是RCC中最常见的一个亚型,占所有RCC病例的75%。细胞周期蛋白依赖性激酶3（cyclin dependent kinase 3,CDK3）属于CDK家族,在细胞周期的调节中发挥重要作用。新近研究发现,CDK3蛋白水平在部分癌组织和细胞中呈显著性高表达。然而,CDK3在ccRCC发生中的作用及分子机制尚不清楚。研究方法:本课题首先分析不同亚型RCC组织和细胞中CDK3的表达情况,及CDK3表达水平与ccRCC患者临床特征之间的关系;其次研究CDK3对ccRCC细胞（786-O和Caki-1）增殖、细胞周期和凋亡的影响;第三,研究CDK3影响ccRCC细胞周期和凋亡的分子机制。（1）利用生物信息学技术,分析CDK3在嫌色细胞RCC（chromophobe RCC,ch RCC）、乳头状RCC（papillary RCC,p RCC）和ccRCC及其癌旁组织中的表达;（2）采用Western blot和q RT-PCR实验检测RCC细胞系（Caki-1、A498、A704、786-O、ACHN和OS-RC-2）和正常肾细胞（HK-2）中CDK3的表达情况;（3）分析CDK3的表达与ccRCC患者临床特征之间的关系;（4）CCK-8、Western blot实验,检测CDK3对ccRCC细胞增殖的影响;（5）流式细胞术、Western blot和AO/EB染色实验检测CDK3对ccRCC细胞周期和凋亡的影响;（6）生物信息学分析CDK3参与ccRCC的可能通路;（7）Western blot和流式细胞术实验检测在ccRCC细胞中CDK3与PI3K/AKT通路的关系。结果:（1）CDK3在三种不同RCC亚型中的表达有显著性差异,其在ccRCC组织和细胞中的表达显著高于对照;并且其表达水平与ccRCC患者不同种族、性别、肿瘤浸润程度的分级和TNM分级之间有显著性关联,高表达CDK3的患者生存率显著小于低表达患者;（2）降低ccRCC细胞（786-O和Caki-1）内CDK3的表达水平后,抑制细胞的增殖,诱导细胞周期G0/G1期阻滞、以及细胞凋亡的发生;（3）生物信息学分析发现,CDK3可能通过PI3K/AKT通路参与ccRCC;siCDK3降低细胞内CDK3的表达后,pAKT的表达也显著性降低。加入SC79激活剂在升高pAKT水平的同时、诱导cyclin E1和cyclin D1的表达也显著增加,细胞周期G0/G1期细胞比例明显下降。结论:（1）CDK3的高表达与RCC亚型中的ccRCC发生有特异相关性;（2）CDK3通过PI3K/AKT通路调控ccRCC细胞增殖、周期和凋亡过程。意义:通过研究CDK3与ccRCC发生的关系,阐述CDK3调控ccRCC细胞增殖和凋亡过程中的分子机制,为以CDK3介导的ccRCC靶向治疗研究提供实验依据。
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