论文部分内容阅读
平卧菊三七Gynura procumbens（Lour.）Merr,又称平卧菊三七,为菊科菊三七属的一年生草本植物,在我国江西、广东、海南及贵州等地有广泛种植。平卧菊三七含有黄酮类、萜类、脂肪酸类及酚类等化学成分,有着丰富的生物活性如抗肿瘤、抗炎及抗氧化活性等。近年来国内外对平卧菊三七的研究集中在其叶的化学成分及生物活性,而关于平卧菊三七花的化学成分及生物活性却未见报道。本文以平卧菊三七花为原料,系统的研究了平卧菊三七花的化学成分及主要成分含量,评价了其抗氧化活性及抗炎活性,并对其抗炎活性作用机制及物质基础进行了深入研究,为深度开发平卧菊三七资源提供了理论依据。主要研究方法及结果如下:综合运用了各种柱层析分离方法,对平卧菊三七花提取物及乙酸乙酯萃取部位进行了系统的分离纯化,经波谱解析（1H-NMR,13C-NMR等）并对照相关参考文献后,共分离鉴定得到 13 个化合物,分别为 n-Hexacos-5,8,11-trienoic acid（1）、β-sitosterol（2）、Aurantiamide acetate（3）、Cis-9-Octadecenoic acid（4）、（Z）-undec-4-ene（5）、Dodecyl（Z）-9-hexadecenoate（6）、Neochlorogenic acid（7）、Chlorogenic acid（8）、Cryptochlorogenic acid（9）、isochlorogenic acid B（10）、4,5-di-O-caffeoylquinic acid n-butyl ester（11）、isochlorogenic acidA（12）和 isochlorogenic acid C（13）。所有化合物均为首次从平卧菊三七花中分离得到,其中,化合物1,3,4,5,6和11均为首次从平卧菊三七中分离得到。分别利用硝酸铝法和福林酚法对平卧菊三七花提取物（Gynura procumbens flower extract,GPFE）中的总黄酮及总酚含量进行了测定,结果表明,其总黄酮含量为119.245 mg RE/g提取物;总酚含量为45.563 mg GAE/g提取物。此外,建立了一种HPLC法同时测定GPFE中的五种咖啡酰奎宁酸类化合物,结果表明:GPFE中绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C及新绿原酸的含量分别为5.046,8.386,5.716,5.899,1.181 mg/g。对GPFE的抗氧化及抗炎活性进行了研究与初步评价。对GPFE进行了 ABTS+·与DPPH·的清除能力及Fe3+还原能力活性评价,结果表明:GPFE具有较好的Fe3+还原能力,也具有较强的ABTS+·及DPPH·的清除能力,其对ABTS+·及DPPH·的半数清除率IC50分别为0.180 mg/mL和0.158 mg/mL。建立脂多糖（LPS）刺激RAW264.7小鼠巨噬细胞产生炎症模型,通过Griess法测定了 GPFE对LPS刺激的RAW264.7细胞NO分泌的影响,通过MTT法评估了 GPFE对RAW264.7细胞存活率的影响,结果表明:12.5～100 μg/mL浓度范围内的GPFE均显著降低了 NO含量,且无任何细胞毒性,表明其具有较强的抗炎活性。综合运用ELASA、RT-qPCR、免疫荧光和Western blot等方法进一步研究了 GPFE的具体抗炎作用机制。结果表明:GPFE可以显著降低NO、TNF-α、IL-1β、PGE2及IL-6等炎症因子的释放;在基因水平上,GPFE显著抑制了 iNOS、COX-2、TNF-α、IL-1β及IL-6mRNA的转录;在蛋白水平上,GPFE显著抑制了 iNOS和COX-2蛋白的表达;此外,GPFE还可通过下调MAPK通路并抑制NF-κB p65的核转位来减轻炎症。对GPFE中分离得到的13个化合物进行了抗炎活性的初步筛选及评价,结果表明:n-Hexacos-5,8,11-trienoic acid,β-sitosterol 和 Aurantiamide acetate 均显著降低了NO的释放且无细胞毒性,表现出较好的抗炎活性,推测其可能是GPFE发挥抗炎作用的主要物质。