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马铃薯Y病毒（PotatoVirus Y，PVY）是我国烟草PVY病害的主要毒源，其编码的基因组连接蛋白（viral genome-linked protein，VPg）参与病毒基因组的复制、翻译与病毒的移动，在病毒侵染过程中发挥着重要作用。本研究将马铃薯Y病毒VPg基因转化进烟草感病品种LJ925，初步观察了VPg在烟草中的亚细胞定位情况，并分析了转基因对烟草抗病性的影响。 本研究采用RT-PCR方法从感PVY病的烟草感病品种LJ925中克隆目的基因VPg，将其与pUCM18-T载体连接，通过测序验证VPg基因序列的正确性，利用 Gateway技术构建表达载体，电击法获得工程菌，叶盘法对烟草感病品种LJ925进行遗传转化，通过卡那筛选，获得95株卡那霉素抗性苗，从中选出50株进行PCR扩增检测，VPg基因转入烟草的阳性转化率为70%。在荧光显微镜下观察阳性转化株叶片下表皮的亚细胞定位情况，结果显示与阴性对照相比阳性转化株中的VPg-GFP融合蛋白主要集中在气孔内壁上。选取8株阳性转化株和1株阴性对照株，采用实时荧光定量PCR技术( real-time fluorescent quantitative PCR，FQ-PCR)检测转化株中VPg基因的相对表达量，FQ-PCR结果显示，VPg基因的Ct值在20.94与28.90之间，对以上9株烟草通过机械摩擦接种PVY，在接种8d后阴性对照株开始表现出叶脉坏死的症状，编号为VPg93的转化株未表现病症（接种后第30d表现病症），其余转化株均与对照表现同样的病症，此时再对这9株植株进行 FQ-PCR，通过检测外源基因 hcp的相对表达量来反映PVY对烟草的侵染程度，FQ-PCR结果显示，与对照株中hcp的Ct值相比，除了 VPg93明显比对照株大外，其余的转化株均与对照株相差无几。对比接种病毒前后两次FQ-PCR的数据，分析结果表明除了编号为VPg93的转化株接种PVY后病症延迟外，马铃薯Y病毒VPg基因的遗传转化对其余转化株的抗病性没有影响。