【摘 要】
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目的 对帕金森病抑郁小鼠肠道菌群特点进行初步分析,并探讨益生菌对帕金森病抑郁小鼠肠道菌群及相关炎性因子的影响,为研究帕金森病抑郁的病因、发病机制及治疗提供新的思路。方法 选取50只成年雄性小鼠（C57/BL6）,每只小鼠体重25～30g,随机分成5组,即正常对照组、单纯抑郁组、单纯PD组、帕金森病抑郁组（PDD组）和益生菌治疗组。采用腹腔注射MPTP（30mg/kg×7d）建立帕金森病（PD）小鼠
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目的 对帕金森病抑郁小鼠肠道菌群特点进行初步分析,并探讨益生菌对帕金森病抑郁小鼠肠道菌群及相关炎性因子的影响,为研究帕金森病抑郁的病因、发病机制及治疗提供新的思路。方法 选取50只成年雄性小鼠（C57/BL6）,每只小鼠体重25～30g,随机分成5组,即正常对照组、单纯抑郁组、单纯PD组、帕金森病抑郁组（PDD组）和益生菌治疗组。采用腹腔注射MPTP（30mg/kg×7d）建立帕金森病（PD）小鼠模型,通过慢性不可预知温和应激（21天）构建抑郁小鼠模型。上述两种方法结合建立帕金森病抑郁（PDD）小鼠模型。通过强迫游泳测试和糖水偏好实验对小鼠的抑郁样行为进行评价。取各组海马应用ELISA法定量分析5-HT的量。采集上述5组动物的新鲜粪便开展16S r DNA分析,通过基因测序对不同样本菌群代谢功能进行评估,根据分析结果与测序结果,找到有显著差异的菌属及其代谢功能。采集上述5组动物的血液,经流式细胞术确定血液TH17变化情况,经ELISA定量分析方法确定血液IL-17A含量。取各组黑质纹状体应用Western Blot分析维甲酸相关核孤儿抗体（ROR t）、肿瘤坏死因子（TNF-α）和IL-17A。研究数据使用SPSS23.0处理,符合正态分布或近似正态分布的计量资料以均数±标准差（x±s）表示,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较应用LSD法,P<0.05,表明两组数据具备统计学差异。结果1 强迫游泳结果显示,与正常对照组相比,其余四组游泳静止不动时间显著增多,差异有统计学意义（P<0.05）,糖水偏好结果显示,与正常对照组相比,其余四组糖水偏爱率均减低,差异有统计学意义（P<0.05）;与PDD组相比,益生菌治疗组糖水偏爱率升高,差异有统计学意义（P<0.05）。2 ELISA结果显示,PDD组海马5-HT与其他组对比差异呈现统计学意义（P<0.05）。3粪便分析中分类学组成分析示在门类别水平基础上PDD组中拟杆菌门和厚壁菌门相对较丰富,益生菌治疗组中厚壁菌门相对较丰富。在纲类别水平的基础上,PDD组中梭菌纲相对较丰富,益生菌治疗组中芽孢纲菌纲相对较丰富。在目类别水平的基础上,PDD组中拟杆菌目相对较丰富,益生菌治疗组中乳杆菌目相对较丰富。在科类别水平的基础上,PDD组中S24-7科相对较丰富,益生菌治疗组中毛螺菌科相对较丰富。在属类别水平的基础上,PDD组中其他类的属相对丰富,益生菌治疗组中乳杆菌属相对丰富;在α多样性指数结果显示,PDD组中Chao、Ace、Shannon值升高,治疗组Chao、Ace、Shannon值相对减低（P<0.05）;LEf Se分析示PDD组中变形杆菌中的梭状芽孢杆菌、醋杆菌、葡糖杆菌显著异于其他组（P<0.05,LDA>2）。3流式细胞术结果显示PDD小鼠外周血中TH17细胞显著增多,治疗组Th17细胞减低（P<0.05）4 WB结果显示在小鼠黑织纹状体中,PDD组中Th17细胞的特异性转录因子RORγt和致炎因子IL-17、TNF-α蛋白均显著高于其他组（P<0.05）,益生菌治疗组RORγt和IL-17、TNF-α低于PDD组（P<0.05）。结论1 帕金森病抑郁小鼠存在肠道菌群异常,变形杆菌中的梭状芽孢杆菌、醋杆菌、葡糖杆菌显著高于其他组。肠道菌群异常可能与帕金森病抑郁发病有关。2 益生菌可改善帕金森病抑郁小鼠肠道菌群失衡,并可抑制炎性因子Th17、IL-17A、RORγt和TNF-α的表达,减轻炎症反应,进而改善帕金森病抑郁症状。图11幅;表9个;参110篇。
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