【摘 要】
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目的:观察antisenseEGFR对肺腺癌细胞系的生长作用和放疗增敏作用,为临床开展放射治疗联合基因治疗提供实验依据。 方法:用免疫组化法检测EGFR高表达的肺腺癌细胞系spc-a-
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目的:观察antisenseEGFR对肺腺癌细胞系的生长作用和放疗增敏作用,为临床开展放射治疗联合基因治疗提供实验依据。 方法:用免疫组化法检测EGFR高表达的肺腺癌细胞系spc-a-1。扩增并提取pcDNA3—antisenseEGFR质粒和pcDNA3空质粒,在脂质体介导下用质粒pcDNA3—antisenseEGFR转染spc-a-1细胞,并以空质粒pcDNA3转染spc-a-1细胞做对照。用G418筛选稳定表达的细胞克隆,以RT-PCR和Western blot检测转染后EGFR的mRNA及蛋白表达抑制情况,流式细胞仪检测转染后细胞周期的变化,绘制生长曲线,评价细胞生长情况。然后分为五个实验组:未转染的细胞(正常细胞组),单纯放疗组,单纯pcDNA3-antisenseEGFR转染组,空质粒pcDNA3转染+放疗组,pcDNA3-antisenseEGFR转染+放疗组。给予6MVX射线,800cGy剂量照射,48h后用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,生长曲线检测细胞生长情况。 结果:转染pcDNA3-antisenseEGFR组与未转染细胞组、空载体转染组比较,EGFR mRNA和蛋白表达量明显减少,细胞生长延迟,细胞周期阻滞在G2、M期,S期细胞减少,有统计学差异(p<0.05),而正常细胞组和空载体转染组间无统计学差异(p>0.05)。转染pcDNA3-antisenseEGFR+放疗组与未转染的细胞(正常细胞组)、单纯放疗组、单纯pcDNA3-antisenseEGFR转染组、空质粒pcDNA3转染+放疗组比较,细胞生长明显延迟,凋亡明显增加,有统计学差异(p<0.01)。 结论:研究结果表明antisenseEGFR可以抑制肺癌细胞的生长,增加了肺癌细胞系spc-a-1的放疗敏感性,为进行体内实验提供了坚实的基础。
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