生产上传统的杂交育种困难,并且杂交育种周期长。通过核桃的有性繁殖与生物技术相结合的方法,将杂交后的种胚直接进行组织培养,当年获得杂种苗,在两年的时间里可获得具有变异性状的新的单株,既可克服生产上杂交育种的困难,又可缩短核桃的育种年限。核桃胚培养存在外植体污染率高、接种后褐变严重以及成活率不高等问题。本文针对这些问题,分别于2007年、2008年进行了早实核桃生殖特性、无菌繁殖体系的建立、防止核桃胚培养褐化技术、核桃胚培养条件及其快速成苗途径的研究。1.对‘绿岭’等5个早实核桃品种的开花结果物候期、无融合生殖能力、花粉形状与大小等生殖特性的研究结果表明:从雌花芽膨大到开放所需积温:‘绿早’(130℃左右),‘绿岭’、‘香玲’、‘辽1’、‘辽3’(360～410℃),‘绿早’较‘绿岭’、‘香玲’、‘辽1’、‘辽3’品种在较低的温度下雌花就能开放,对温度的要求条件较低。雄先型品种‘绿岭’、‘香玲’、‘辽3’、‘辽1’雄花花期(自雄花散粉初期至散粉末期)分别为13d、17d、18d、13d,一般为13～18d,雌花花期(雌花开放初期至末花期)分别为9d、9d、9d、8d;一般为8～11d;雌雄花期分别相差15d、16d、19d、15d。雌先型品种‘绿早’核桃的混合花芽于3月20日开始膨大,从膨大到开花约需11d,花期(指开花初期至末花期)约为11d;雄花芽于3月18日开始膨大,雄花在4月9日开放,花期(自散粉初期至末期)为15d;雌雄花期相差8d,分别于花后15d、30d进入坐果期、生理落果期。雌先型和雄先型核桃品种均具有无融合生殖能力,雌先型品种的无融合生殖能力低于雄先型。不同早实核桃品种间无融合生殖率有明显差异;‘绿岭’核桃无融合生殖率最高,为42.10%,‘香玲’、‘辽1’次之,‘绿早’无融合生殖率最低,为11.64%。在所测定的早实核桃品种中,‘绿早’、‘辽3’的花粉生活力均在93%以上,‘香玲’核桃花粉的生活力极显著低于其它品种,仅为62.72%;‘绿早’柱头向两侧张开呈倒‘八’字形时,柱头接受花粉能力最强,为授粉的最佳时期,之后柱头逐渐开始枯萎,失去授粉能力。‘绿早’核桃的有效授粉期为开花后1～6d,最佳授粉期为开花后2～5d。2.‘香玲’自然杂种核桃经储藏后进行胚培养,接种1周后,带子叶种胚用0.1%的HgCl2消毒5min的污染率最低,为7%,不消毒的污染率最高,达87%;采集果实后立即进行胚培养,对带子叶种胚用25%、15%NaClO和75%酒精消毒,接种后均未发生污染。试验选用的4种培养基中,核桃杂交胚培养的最适培养基为MS+3%蔗糖+0.6%～0.8%琼脂,pH值6.0～7.0,在此培养基上杂交胚的萌发率最高,为90.2%,生根率达89.6%;最适培养环境为:光照强度4000LX、温度25～30℃;组培苗后期最佳壮苗培养基为DKW+2mg·L-16-BA+1.0mg·L-1IAA;在蛭石、沙子和普通壤土3种移栽基质处理中,以将核桃生根苗移栽到沙子基质中成活率最高,达83.3%;普通壤土基质次之,为80%;蛭石基质最低,仅为40%。硬核期核桃杂交胚培养萌发率可达到86.6%,与成熟期核桃胚培养相比可提前40d成苗。青皮果经4℃低温储藏1周、2周均可促进组培杂交胚胚根的伸长,但对后期的茎叶生长没有影响。3.不同种胚接种方式中,以带子叶接种种胚褐化最严重,接种当天便有褐化发生,接种1d后全部褐化,培养基褐化面积大;其次是带1/2子叶种胚褐化较重,接种1d后全部褐化,培养基褐化面积小;而不带子叶的种胚接种后不产生褐化;培养基中添加300～500mg·L-1的PVP和5.0、10.0、15.0mg·L-1Vc均不能有效防止带子叶的种胚的褐化,培养基的颜色会由透明变为深褐色;转接可以减轻培养基的颜色变褐,但不能减轻带子叶的种胚的褐化。带子叶的核桃胚培养4周后,仅出现子叶转绿、开裂和子叶基部膨大现象。不带子叶的核桃胚培养4周后可成苗,移栽后成活率达88.9%。