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目的建立大鼠定量视神经损伤模型,为研究视神经损伤后的治疗奠定基础。方法健康SD大鼠54只,随机分为三组,分别为损伤组(A组)、假损伤对照组(B组)、正常对照组(C组)。A组24只大鼠,左眼为损伤眼,右眼为未损伤眼,作为对照,按损伤后存活时间不同分为3d组、7d组、14d组、28d组,每组6只,暴露视神经,应用40g力的视神经夹在大鼠眼球后2mm处夹视神经30s；B组24只大鼠,左眼为假损伤眼,右眼为未损伤眼,作为对照,按损伤后存活时间不同分为3d组、7d组、14d组、28d组,每组6只,仅暴露视神经但不进行钳夹损伤；6只为正常对照组。均于处死前7d采用双上丘注射5%荧光金(FG)标记双眼视网膜神经节细胞。取眼球标本并分离视神经至视交叉。视网膜铺片荧光照相,RGCs计数及RGCs标识率计算。并对视网膜切片进行苏木精-伊红染色,观察视神经损伤后视网膜形态学变化。结果1.FG逆行标记进行RGC计数及RGCs标识率：损伤组各时间点损伤眼RGCs计数(3d组152.26±25.12,7d组111.19±20.32,14d组101.23±17.19,28d组94.86±18.26)与非损伤眼(3d组192.16±32.12,7d组189.26±26.16,14d组191.76±25.29,28d组186.56±23.76)比较,差异均有显著性(P<0.05)。正常对照组及假损伤对照组左、右眼RGCs比较,差异无显著性(P>0.05)。2.损伤眼视神经损伤后不同时间RCCs计数(3d组152.26±25.12,7d组111.19±20.32,14d组101.23±17.19,28d组94.86±18.26)逐渐下降(P<0.05),各时间点RCCs计数两两比较,14d组与28d组间差异无显著性(乃0.05),其他时间点间比较差异均有显著性(P<0.05)。视神经损伤后RGCs标识率(3d组79.35%±8.29%,7d组59.76%±7.79%,14d组53.26%±7.26%,28d组51.29%±3.26%)随时间延长渐进性降低(P<0.05)。各时间点RGCs标识率两两比较,14d组与28d组间差异无显著性(P>0.05),其他时间点间比较差异均有显著性(P<0.05)。正常对照组及假损伤对照组不同时间点RCCs计数及RGCs标识率差异均无显著性(P>0.05)。3.组织病理改变：损伤组：视神经损伤后,视网膜神经节细胞层出现核固缩、视网膜各层变薄、细胞排列紊乱、视网膜神经节细胞减少,致伤后不同时间点上述改变的程度不同。损伤处视神经肿胀、出血,胶质细胞排列紊乱,空泡样变性,随损伤后时间延长而加重。正常对照组及假损伤对照组未见明显病理改变结论应用40g力视神经夹在大鼠眼球后2mm处夹视神经30s能成功建立定量视神经损伤动物模型。目的观察研究人脐血干细胞(hUCBSC)移植对视神经部分受损S-D大鼠视网膜节细胞(RGCs)的保护作用。方法将96只健康成年S-D大鼠随机分为六组,每组16只,均使用第一章得到的方法在成年SD大鼠造成部分视神经损伤模型,均损伤左眼。A组：伤后1周玻璃体腔注射脐血干细胞载体(PBS),B组：伤后1周玻璃体腔注射神经营养因子,C组：伤后1周玻璃体腔注射hUCBSC,D组：伤后1周玻璃体腔注射hUCBSC+神经营养因子,E组：伤后1周球周注射hUCBSC,F组：伤后1周尾静脉注射hUCBSC。六组分别于注射后7d、14d、21d、28d处死动物。处死前7天双上丘注射5%荧光金(FG)逆行标记双眼RGCS。然后按时间先后处死大鼠分离视网膜置于荧光显微镜下,计数RGCs并计算RGCs标识率,进行统计分析。结果A、B、C、D四组视神经损伤眼RGCs计数均低于未损伤眼(P<0.05),且随时间延长四组RGCs标识率均呈下降趋势,且组内前后时间段比较均有显著性差异(P<0.05),但B组、C组、D组下降幅度明显较A组平缓。同时间段组间比较显示B组、C组、D组RGCs标识率均高于A组,且差异均具有显著性(P<0.05)。D组RGCs标识率均高于B组、C组,且差异均具有显著性(P<0.05)。B组RGCs标识率与C组无显著性差异(P>0.05)。C、E、F三组视神经损伤眼节细胞计数均低于未损伤眼(P<0.05),且随时间延长三组RGCs标识率均呈下降趋势,且组内前后时间段比较均有显著性差异,但C组下降幅度明显较E组、F组平缓。同时间段组间比较显示C组RGCs标识率高于E组、F组,且差异均具有显著性(P<0.05)。E组RGCs标识率与F组无显著性差异(P>0.05)。结论hUCBSC移植入视神经损伤大鼠视网膜中可减缓RGCs的凋亡,对RGCs具有一定的保护作用,其与神经营养因子作用强度相仿,而hUCBSC+神经营养因子保护作用最强,且玻璃体腔注射法效果最佳。目的探讨人脐血干细胞(hUCBSC)移植在大鼠视神经损伤后对受损视网膜节细胞保护的机制。方法将36只健康成年S-D大鼠随机分为A组(hUCBSC移植组)和B组(对照组)。每组18只大鼠,两组各取15只制成视神经部分损伤大鼠模型,左眼为损伤眼。另3只作为正常眼进行组内的对照,A组损伤眼玻璃体腔注射hUSBSC悬液(106个),B组损伤眼注射同等体积PBS,两组分别于治疗后3d、7d、14d、21d、28d(每个时间段3只大鼠,另外3只作为移植前正常大鼠)采用半定量RT-PCR方法检测BDNF、GDNF mRNA在视网膜内的表达水平。结果hUCBSC移植后A组(hUCBSC移植组)与B组(对照组)相比,除第1周视网膜内表达BDNF无明显差别外,余时间段BDNF、GDNF在视网膜内分泌水平A组均明显高于B组。移植组BDNF表达一直呈升高趋势,特别是在14d后,升高更加明显.；而移植组GDNF表达21d升高至高峰,28d时也有下降。表明hUCBSC移植后在视网膜内持续分泌BDNF及GDNF。结论hUCBSC在视神经损伤大鼠视网膜内可持续分泌神经营养因子BDNF及GDNF,弥补视神经损伤后维持节细胞生存所匮乏的营养因子,这可能是hUCBSC对视神经损伤后节细胞保护及神经修复的重要机制之一。