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应激是由心理,环境或生理压力因素引起的不稳定状态或干扰体内平衡的状态。适度“唤醒”交感神经系统(sympathetic nerve system,SNS)和丘脑-垂体-肾上腺轴(The hypothalamic–pituitary–adrenal axis,HPA)释放化学介质保护机体免受伤害。慢性应激使HPA持续处于激活状态,使得体内激素分泌紊乱引发疾病,如心血管疾病、抑郁、糖尿病、自身免疫性疾病、癌症等。大麻二酚具有抗炎、抗癌、抗神经退行性疾病等药理活性,有着很好的开发应用前景。Nrf2通路在许多疾病中发挥抗氧化应激作用。本文通过以下方面对大麻二酚的抗应激活性进行研究。第一部分:大麻二酚抗慢性应激致肾损伤的保护作用研究采用水浸束缚法建立慢性应激模型并观测大麻二酚的抗应激效应。将30只雌性SD大鼠随机分为如下5组:正常对照组、模型组、CBD低剂量(5 mg/kg)、CBD高剂量(10 mg/kg)和溶媒对照组(1%吐温80生理盐水)。除了空白对照组外,其余各组动物均通过水浸束缚8小时/天,连续21天不间断造模。通过观察正常对照组与模型组大鼠肾组织HE染色、血清皮质酮和肾小球滤过损伤标志物胱抑素C(Cys C)水平,成功建立慢性应激性肾损伤的大鼠动物模型。结果发现,5mg/kg的大麻二酚对慢性应激性肾损伤具有较好的保护作用。大麻二酚给药组的大鼠血清中Cys C、尿蛋白、丙二醛(MDA)水平降低均比模型组(p<0.05)。通过肾脏脏器系数可以看出大麻二酚对肾脏的毒性小、安全性高。大麻二酚减轻慢性应激造成的肾损害与降低血清和组织中的MDA含量、增加肾组织中还原性谷胱甘肽(GSH)含量有关。第二部分:大麻二酚的体外抗氧化应激损伤研究通过MTT法观察大麻二酚对叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导细胞损伤的影响。大麻二酚浓度为5μM以下时,对HMC细胞活力没有明显影响。用t-BHP作造模剂模拟慢性应激导致体内增加的活性氧。实验证明大麻二酚可以预防t-BHP诱导HMC细胞活力的下降,提示大麻二酚有抗氧化作用。第三部分:大麻二酚抗t-BHP诱导的细胞凋亡机制研究分析0.63μM、1.25μM、2.50μM不同剂量的大麻二酚对t-BHP致损的HMC的保护作用。通过Annexin-FITC/PI双染实验、Hoechest33258染色、分光光度法检测caspase-3活性观测HMC细胞凋亡情况,发现大麻二酚能抑制t-BHP诱导的细胞凋亡、降低caspase-3活性,并具有剂量依赖性。大麻二酚能明显抑制t-BHP诱导的活性氧增加和线粒体膜电位下降(p<0.05)。同时通过乳酸脱氢酶(LDH)含量分析,大麻二酚能减少LDH泄漏,保护细胞完整性。发现大麻二酚能提高HMC细胞GSH含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。通过Western Blot分析发现大麻二酚下调BAX和Cleaved-caspase3蛋白的表达(P<0.05)。第四部分:大麻二酚上调Nrf2抗氧化通路减轻t-BHP诱导的凋亡采用Western Blot检测抗氧化蛋白表达发现大麻二酚上调Nrf2、HO-1、NQO1、SOD和Gpx等蛋白的表达(P<0.05),同时下调Keap1蛋白的表达(P<0.05)。CBD能够促进Nrf2的核转位而发挥抗氧化作用,提示CBD可以通过提高抗氧化因子水平而发挥抗氧化应激导致的肾小球系膜细胞HMC损伤的作用。综上所述,大麻二酚通过Nrf2通路发挥抗氧化、抗凋亡活性,为其应用于精神、情绪障碍导致的内脏损伤的防治提供一定的科学依据。