使用ω-转氨酶的单酶级联反应中平衡的消除研究

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日常生活中,手性与我们紧密联系着,它涉及了很多方面,比如医药、农药、化工以及生命等等。手性胺是一种关键的中间体和关键成分,用来开发包括工业规模药物生产和农用化学品在内的大量生物活性的化合物,在这些行业发挥着非常重要的作用。α-苯乙胺(phenylethylamine PEA)的手性立体构型具有光学活性,被广泛地应用于手性拆分剂,来拆分有机酸这一类的物质。它作为手性助剂也是应用非常广泛,并且它还是很多手性化合物的合成原料。PEA主要通过动力学拆分和不对称合成两种合成方法得到。(R)-3-氨基-1-丁醇((R)-3-amino-1-butanol)是目前合成抗HIV整合酶抑制剂度鲁特韦的重要中间体,(R)-3-氨基-1-丁醇还可以用来作为合成青霉烯类抗生素的中间体,故而对(R)-3-氨基-1-丁醇的合成研究具有很重要的意义。合成手性胺的方法中,利用ω-转氨酶不对称合成手性胺由于其反应底物转化率高、反应过程简单、反应产物立体选择性高等优点,广受研究人员的青睐,得到光学纯度的手性胺也是应用于工业生产的关键。但是这种方法合成手性胺,存在平衡移动的问题,产物胺或酮都会抑制酶的活性,影响反应平衡正向移动。故此,消除平衡移动问题,寻求一种绿色、简便、可以达到更高转化率和立体选择性的合成方法,是现在急需解决的难点。本文提出一种绿色合成高转化率、高ee值的(R)-和(S)-α-苯乙胺的方法。利用ω-转氨酶在不借助昂贵的辅因子(NAD(P)H)依赖性辅酶去除副产物的前提下,在高效的单酶体系中合成手性胺。使用芳香族氨基供体苯甲胺,它能够被具有(R)-或(S)-对映选择性的转氨酶接受,使反应以仅适用3个当量氨基供体时,可以以99%的优异转化率以及>99%的ee值进行。在氨基转移过程中,生成的副产物醛通过1个大气压的氧气进行有氧氧化而不可逆地转化成其相应的羧酸,因此,平衡被成功地推到了产物一侧。有氧氧化促进了转氨基作用,并且相应的方法及实验条件与广泛的ω-转氨酶相容。这里使用的氨基供体容易从商业中获得,并且适合于低成本和可缩放的制备,代表了一种高附加值手性胺的清洁合成的有前途的途径。本文还提出一种在双酶体系下合成(R)-3-氨基-1-丁醇的方法。利用ω-转氨酶和羰基还原酶的级联反应,不借助昂贵的辅因子(NAD(P)H)依赖性辅酶去除副产物,高效合成手性胺。使用外消旋的α-苯乙胺作为氨基供体,4-羟基-2-丁酮作为底物受体。两种方法进行反应:a.ω-转氨酶和羰基还原酶级联反应;b.两种菌种培养之后进行全细胞反应。转氨酶催化转移胺基之后,得到手性胺,同时生成副产物苯乙酮通过羰基还原酶转化为高光学纯度的手性醇化合物,去除反应平衡,增加产物的高附加值。
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