论文部分内容阅读
一、胰岛素样生长因子—1(IGF-1)在骨损伤修复中的作用研究 目的：探讨骨折合并中枢神经损伤后，在骨折愈合加速过程中IGF-1所起的作用。方法：将30例住院患者和5例健康自愿者分为4组(单纯脑外伤、骨折合并脑外伤、单纯骨折各10例，正常组5例)。于受伤后3、7、14天抽取外周静脉血，离心后得血清，用ELISA法测定血清中IGF-1含量；用三种浓度(0.1％、1％及10％，v∶v)的血清作用于人骨髓基质干细胞，MTT法测定骨髓基质干细胞的增殖情况。结果：单纯脑外伤、骨折合并脑外伤组IGF-1含量相似于正常组，但均高于单纯骨折组，差异有显著统计学意义(P＜0.01)。4组血清对人骨髓基质干细胞增殖均有促进作用，并且这种作用呈浓度依赖性。在血清浓度为10％时，各组血清的促骨髓基质干细胞增殖的作用呈现差异，脑外伤合并骨折组、脑外伤组的作用与正常组相似，但显著高于单纯骨折组。结论：(1)与单纯骨折组相比，颅脑外伤后血清对骨髓基质干细胞增殖有促进作用。(2)颅脑外伤后血清中IGF-1含量显著高于单纯骨折组，但与正常组相比并不增加。因此，体液调节因素(IGF-1)是中枢神经损伤骨折愈合加速的可能原因。 二、人胰岛素样生长因子-1基因的克隆及在真核细胞的瞬时表达 目的：构建人胰岛素样生长因子-1(IGF—1)的真核表达载体，并在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)内进行表达。方法：用RT-PCR法从人肝细胞中克隆人IGF—1的基因，将其连入真核表达载体pSec Tag／FRT／V5-His，用NheI和BamHI双酶切及测序鉴定筛选阳性克隆；用脂质体法将阳性克隆转染CHO细胞；收集转染后的细胞上清，用Western blot进行检测。结果：琼脂糖电泳显示RT-PCR扩增出210 bp的条带；PCR产物与载体连接后，经酶切和测序鉴定得到一个阳性克隆；Western blot检测显示转染后细胞上清出现与预计值相符的约7．7 kDa的特异性条带。结论：成功克隆并构建人IGF—1基因的真核表达载体，转染后CHO细