B淋巴细胞刺激因子(BLyS)是肿瘤坏死家族中的重要成员,能促进B细胞生长、分化和凋亡,且对T细胞有一定的调节功效,在哺乳动物的免疫系统中起着重要作用。但是,在硬骨鱼中对BLyS的研究相对较少,尤其卵形鲳鲹B淋巴细胞刺激因子研究更为匮乏。本研究以卵形鲳鲹(Trachinotus Ovatus)为对象,克隆并鉴定了卵形鲳鲹BLyS基因(TroBLyS),并且分析了其序列结构特点,对TroBLyS基因体内和体外的功能进行了初步研究。主要研究内容和结果如下:本研究从硬骨鱼卵形鲳鲹头肾中克隆得到了 B淋巴细胞刺激因子(BLyS)的cDNA序列。序列分析表明,TroBLyS蛋白与其他哺乳动物和鱼类基因结构相似,基因序列同源性较高,具有类似的功能区和受体结合位点,包括一个弗林酶切位点(RKRR)、“Flap”环和三个保守的半胱氨酸残基(Cys-121,Cys-211,Cys-224),不含有信号肽属于Ⅱ型跨膜蛋白。系统进化树分析揭示,TroBLyS与同为鲈形目的鱼(Miichthys miiuy)、日本鲈鱼(Lateolabraxjaponicus)、青石斑鱼(Epinephelus awoara)聚为一支。推测TroBLyS可能具有和其他硬骨鱼相似的功能。qRT-PCR组织特异性分析结果表明,TroBLyS在健康卵形鲳鲹的肝脏、头肾、肌肉、脾脏、皮肤、血液、胃、肠、鳃、脑、心脏共11个组织中均有表达,在免疫相关器官肝脏、头肾、脾脏中表达量较高。哈维氏弧菌刺激后,TroBLyS在肝脏、脾脏、头肾中表达量显著增加。结果表明TroBLyS可能参与了卵形鲳鲹机体抵御病原菌感染的免疫应答反应。为研究TroBLyS的功能,本研究进行了体外重组及纯化。结果表明纯化的重组蛋白rTroBLyS能促进卵形鲳鲹淋巴细胞的增殖。同时,本研究进行了卵形鲳鳍体内实验。构建了真核表达质粒pTroBLyS并且肌肉注射卵形鲳鲹,结果表明,pTroBLyS的过量表达能显著提高巨噬细胞的活性和酸碱性磷酸酶的水平。随后用哈氏维弧菌的侵染实验表明,免疫pTroBLyS质粒的卵形鲳鲹,其细菌感染量明显低于对照组(未免疫组)。推测可能是由于过量表达的pTroBLyS提高了卵形鲳鲹巨噬细胞的活性并且提高了清除入侵病原菌的能力。与过量表达结果一致,当对TroBLyS鱼体内进行干扰表达时,结果表明siTroBLyS能显著抑制TroBLyS的表达,TroBLyS在免疫组织中的表达水平显著降低。侵染哈维氏弧菌实验表明,抑制TroBLyS的表达能显著增加哈维氏弧菌的侵染量。免疫增强剂是指一类能增强机体免疫应答作用的物质,细胞因子有作为免疫增强剂的可能。本研究对pTroBLyS作为免疫增强剂的潜能进行了研究。结果表明,免疫pTroBLyS质粒3周后,哈维氏弧菌进行攻毒实验,对照组的成活率为25.7%,免疫组的成活率为71.5%。这表明TroBLyS可以显著提高卵形鲳鲹的成活率,具有作为免疫增强剂的潜能。这些研究结果均表明,TroBLyS在卵形鲳鲹的抗细菌免疫中发挥了重要作用。本研究结果将丰富卵形鲳鲹抗细菌免疫的机制,并为卵形鲳鲹健康高效养殖提供理论基础。