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目的通过分析miR-4417及其相关的靶基因在稽留流产和正常妊娠早期胚胎绒毛组织中的表达水平,探索miR-4417与稽留流产发生的相关性以及miR-4417对其靶基因的调控作用,并通过建立miR-4417过表达的JEG-3细胞体系,研究miR-4417对细胞增殖、凋亡及迁移等细胞生物学功能的影响。方法1.采用病例对照成组设计的方法,收集广西医科大学第一附属医院计划生育门诊稽留流产患者和早期妊娠且自愿人工终止妊娠健康的孕妇的胚胎绒毛组织样本各50例,同时收集研究对象的一般情况、既往史和临床资料等资料。由在GEO数据库中已筛选出与流产相关且存在表达差异的miR-4417以及由生物信息学方法预测得到与miR-4417相关的靶基因RAB6A、RAB6C、CHST2等,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测miR-4417与其相关的预测靶基因在稽留流产患者和早期妊娠的健康孕妇的胚胎绒毛组织中的表达量,采用独立样本t检验分析两组miR-4417及其预测靶基因的表达差异,并采用Pearson积矩相关等统计学方法分析miR-4417与其相关的预测靶基因RAB6A、RAB6C、CHST2在胚胎绒毛组织中的相关性;2.选择人绒毛癌JEG-3细胞作为研究miR-4417影响细胞生物学行为的研究模型,采用瞬时转染技术建立JEG-3细胞过表达miR-4417的表达体系,并设立阴性对照组即miR-4417 mimics NC组、空白对照组即control组。采用RT-PCR技术检测miR-4417在该细胞体系中的表达水平以验证过表达miR-4417的JEG-3细胞体系是否成功建立,并在该细胞体系中进行细胞增殖实验、细胞凋亡实验以及细胞迁移实验,分别计算细胞增殖活性率、细胞凋亡率以及细胞迁移面积,探索miR-4417对JEG-3细胞生物学行为的影响。结果1.比较病例组与正常对照组一般情况的结果显示:孕周、初潮年龄、经期规律、痛经、孕次以及流产次数在两组孕妇间的差异均无统计学意义(P>0.05),而年龄在两组间存在统计学差异(t=-3.414,P<0.05);2.RT-PCR技术检测miR-4417及其预测靶基因在病例组与正常对照组胚胎绒毛组织中的表达水平结果显示:miR-4417在病例组中的相对表达量显著高于正常对照组(t=-2.35,P=0.022);RAB6A在病例组中的相对表达量显著低于正常对照组(t=2.37,P=0.020);RAB6C在病例组中的相对表达量显著低于正常对照组(t=2.697,P=0.009),而CHST2的相对表达量在两组间无统计学差异(P>0.05);3.miR-4417与其预测靶基因的相对表达量在病例组和正常对照组绒毛组织中的相关分析结果显示:miR-4417与RAB6A在病例组和正常对照组胚胎绒毛组织中的相对表达量呈负相关(r=-0.286,P=0.007),miR-4417与RAB6C的相对表达量亦呈负相关(r=-0.223.P=0.026));4.miR-4417在病例组与正常对照组胚胎绒毛组织中表达水平的年龄分层分析结果显示:在孕妇年龄为19～24岁、25～30岁层间,miR-4417的相对表达量在病例组与正常对照组胚胎绒毛组织中的差异均无统计学意义(P>0.05);在孕妇年龄为31～35岁层间,miR-4417的相对表达量在病例组胚胎绒毛组织中显著高于与正常对照组(t=-3.21,P=0.004);5.RT-PCR技术检测JEG-3细胞转染miR-4417 mimics后各不同处理细胞组miR-4417表达水平的结果显示:miR-4417在control组与miR-4417 mimics NC组中的相对表达量无统计学差异(P>0.05),miR-4417在miR-4417 mimics 组中的相对表达量相对于 control 组、miR-4417 mimics NC组均显著上调(P<0.001),表明JEG-3细胞构建miR-4417过表达体系成功;6.细胞增殖实验的结果显示:培养72小时后,miR-4417 mimics组、control组、miR-4417 mimics NC组细胞的增殖能力的差别具有统计学意义(F=68.27,P<0.001),经两两比较分析后,三组细胞的增殖能力各组间的差异均有统计学意义(P<0.001),且miR-4417 mimics组对JEG-3细胞增殖能力低于 control 组(P<0.001);培养 96 小时后,miR-4417 mimics 组、control组、miR-4417 mimics NC组细胞的增殖能力的差别具有统计学意义(F=50.17,P<0.001),经两两比较分析后,三组细胞的增殖能力各组间的差异均有统计学意义(P<0.001),且miR-4417 mimics组对JEG-3细胞增殖能力低于control 组(P<0.001);7.细胞凋亡实验结果显示:miR-4417 mimics 组、miR-4417 mimics NC组及control组细胞的早期凋亡比例的差异存在统计学意义(F=239.26,P<0.001),经两两比较分析后,三组细胞的早期调亡比例各组间的差异均存在统计学意义(P<0.05),且miR-4417 mimics组细胞的早期凋亡比例比control组低(P=0.018);三组细胞的晚期凋亡比例的差别有统计学意义(F=113.81,P<0.001),经两两比较分析后,miR-4417 mimics 组、control组细胞的晚期凋亡比例均与miR-4417 mimics NC组存在统计差异(P<0.001),而miR-4417 mimics组细胞的晚期凋亡比例与control组无统计差异(P=0.996);三组细胞的总调亡比例的差别有统计学意义(F=114.81,P<0.001),经两两比较分析后,三组细胞的总凋亡比例各组间的差异均存在统计学意义(P<0.05),且miR-4417 mimics组细胞的总凋亡比例比control组低(P=0.027)。8.细胞迁移实验的结果显示:细胞划痕24小时后miR-4417 mimics组、miR-4417 mimics NC组、control组细胞的迁移面积的差异无统计意义(F=1.24,P=0.354),经两两比较分析后,三组细胞的迁移面积各组间的差异均无统计意义(P>0.05);细胞划痕48后三组细胞的迁移面积差异无统计意义(F=3.41,P=0.102),经过两两比较分析后,三组细胞的迁移面积各组间的差异均无统计意义(P>0.05)。结论1.miR-4417在胚胎绒毛组织中的高表达水平可能与稽留流产的发生相关,且在年龄为31～35岁层中miR-4417在病例组胚胎绒毛组织中的相对表达量显著高于正常对照组(t=-3.21,P=0.004)。2.预测靶基因RAB6A、RAB6C可能是miR-4417的作用靶点,miR-4417可能通过负向调控RAB6A、RAB6C的mRNA表达水平从而影响稽留流产的发生。3.在JEG-3细胞中,上调miR-4417的表达水平可能抑制JEG-3细胞的增殖能力以及细胞凋亡的能力,而对JEG-3细胞的迁移能力可能不产生影响。