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目的通过小鼠肝门静脉注入由慢病毒表达载体感染并携带HBx基因的肝前体细胞(14-19细胞),构建在小鼠肝脏内能稳定长时间高表达HBx的动物模型,探究HBx对小鼠肝脏组织凋亡与分化的影响。方法选取6-8周龄雄性昆明小鼠36只,体重(20±2)g,按随机数字表法分为3组,即HBx-14-19组、NC-14-19组和NS组,从小鼠肝门静脉分别注射携带HBx基因的肝前体细胞、空载体肝前体细胞和生理盐水,于术后第30天、60天、90天、120天分别收取小鼠肝脏组织标本。通过荧光显微镜、RT-PCR、western Blot验证肝前体细胞株是否成功转染与表达HBx基因以及小鼠肝脏组织是否能够稳定长期表达HBx蛋白;动物模型构建成功后使用Tunel-FITC/DAPI法检测肝脏组织晚期凋亡率,RT-PCR和western Blot法检测小鼠肝脏组织凋亡和分化的情况。结果IHC结果显示,HBx-14-19组小鼠的肝门静脉、细胞质内及细胞膜中均能观察到黄染的团状细胞,随着术后天数的增加,向远处呈弥散性分布;Tunel-FITC/DAPI法测出凋亡率显著降低,HBx-14-19组、NC-14-19组、NS组凋亡率分别为:(10±2)%、(35±3)%、(30±1)%;RT-PCR和Western Blot实验结果表明与NC-14-19和NS组对比,Bcl2、Mcl-1的mRNA相对表达量上调,Bax的mRNA相对量表达下调,蛋白表达量为:Bcl2(2.78,2.84,3.16,3.4),Mcl-1(1.33,1.37,1.73,2.13),Bax(0.54,0.48,0.35,0.34);随着术后时间的增加CK19 mRNA相对表达量升高,CK18 mRNA相对表达量降低,蛋白表达量为:CK19(1.6、2.32、2.28、2.45),CK18(0.85、0.52、0.48、0.37),差异具有统计学意义(p<0.05)。结论1成功筛选了稳定表达绿色荧光蛋白并携带HBx基因和空载体的肝前体细胞株;成功构建了在小鼠肝脏能够稳定长时间高表达HBx蛋白的动物模型;2通过动物模型证实HBx能够抑制小鼠肝脏组织的凋亡和分化成熟,诱发原发性肝癌发生的早期事件。