【摘 要】
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研究背景与目的:近年来,肺癌的发病率及死亡率一直处于上升趋势,是世界上最常见的癌症之一,位于癌症死亡的首位。虽然肺癌治疗方法众多,化疗就是其中主要治疗方法之一,但由于化疗耐药等现象导致治疗效果差,复发转移快、死亡率高。因此迫切需要开发新型抗癌候选药物。近年来,从中草药中提取的具有生物活性的化合物逐渐成为研究的焦点。和厚朴酚（honokiol,HNK）就是其中一味,HNK具有广泛的治疗作用,包括抗肿
【基金项目】
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NLRP3炎症小体对非小细胞肺癌细菌焦亡的调控作用及机制,国家临床重点专科培养项目,CYFY2018GLPHX02; 和厚朴酚通过调节细胞自噬对小细胞肺癌耐药机制的研究,成都医学院第一附属医院,CYFY2019ZD02
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研究背景与目的:近年来,肺癌的发病率及死亡率一直处于上升趋势,是世界上最常见的癌症之一,位于癌症死亡的首位。虽然肺癌治疗方法众多,化疗就是其中主要治疗方法之一,但由于化疗耐药等现象导致治疗效果差,复发转移快、死亡率高。因此迫切需要开发新型抗癌候选药物。近年来,从中草药中提取的具有生物活性的化合物逐渐成为研究的焦点。和厚朴酚（honokiol,HNK）就是其中一味,HNK具有广泛的治疗作用,包括抗肿瘤。但抗肿瘤具体机制不明,当前研究结果多数集中在HNK通过促进肿瘤细胞凋亡达到抑肿瘤增殖及转移的作用,其他研究机制很少,因此本实验探索HNK对A549细胞细胞周期的作用机制及与自噬的关系,以期发现HNK治疗肺癌新的分子机制。材料与方法:用不同浓度HNK（0.10.20.40.80.160ummol/L）作用与A549细胞,在显微镜下观察细胞形态及数量的变化并拍照。运用CCK-8实验方法检测不同时间节点（6、12、24、48小时）HNK对A549细胞的抑制率。运用流式检测细胞周期分布,WB检测细胞周期相关蛋白的表达情况。设立对照组,溶媒组（DMSO）,HNK组（浓度80ummol/L）,3-MA组,3-MA+HNK组,运用流式检测细胞周期分布,免疫荧光染色检测自噬及WB检测细胞周期及自噬相关蛋白的表达。结果:1.通过显微镜观察,HNK能抑制A549细胞的生长,剂量越大,抑制越强。HNK抑制A549细胞增殖。通过CCK-8实验结果表示,HNK能抑制A549细胞增殖,并且这种抑制具有剂量和时间依赖性。2.运用流式细胞计数检测细胞周期分布,发现随着HNK浓度增加,G0/G1期的细胞比例明显增高,而S期和G2/M期的细胞比例明显减少。WB检测Cyclin D1的表达水平明显降低,P16的表达水平明显增加,且呈剂量相关性。综上结果表明,HNK可诱导A549细胞周期被阻滞于G0/G1期。3.通过不同分组,运用流式细胞计数结果显示与对照组比较HNK能使A549细胞阻滞在G0/G1期比例增加,Cyclin D1的表达水平下降,P16的表达水平增加,而自噬蛋白LC3Ⅱ表达量增加,自噬负性蛋白P62表达量减少,说明HNK能使A549细胞发生自噬,从而使A549细胞周期阻滞。3-MA+HNK组与HNK组比较,A549细胞阻滞在G0/G1期比例减少,Cyclin D1及P62的表达水平增加,P16及LC3Ⅱ表达量减少,说明3-MA能拮抗HNK诱导A549细胞发生的自噬。结论:本实验表明,HNK能诱导A549细胞发生自噬,使A549细胞在G0/G1期发生细胞周期阻滞,从而抑制A549细胞的增殖。HNK可以作为一味潜在的抗肺癌药物。
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