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背景：
糖尿病性白内障(diabetic cataract，DC)是糖尿病患者失明的主要原因之一，是晚期糖尿病患者常见的主要眼部并发症。目前治疗糖性白内障主要手段有药物治疗和手术治疗。但是手术治疗的局限性决定了其不能满足所有白内障患者的需求。因此，用药物来治疗和预防白内障便越来越多地被患者所接受。石斛为名贵传统中药，早有古籍记载其有滋阴补肾、明目强身的功效。本课题组前期从石斛中筛选出对糖性白内障具有预防和治疗作用的成分石斛酚和丁香酸，并对石斛酚和丁香酸抗糖性白内障的作用机制进行了研究。研究实验表明石斛酚和丁香酸对醛糖还原酶（AR）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）具有良好的抑制作用，具有抗高渗、抗氧化的作用；两者联用具有良好的协同作用。在此前提下，本研究首次以石斛酚和丁香酸为主要成分制成石斛滴眼液，并对其临床前进行初步研究，为其进一步推广和研究奠定基础。石斛滴眼液具有有效成分清楚、靶标明确、作用机制明晰等优点，有望开发为Ⅰ类抗DC新药，若能上市，将给广大患者带来福音。
目的：
对“石斛滴眼液”临床前质量控制、药效、药动学及安全性评价进行研究，为石斛滴眼液的临床研究奠定基础。
方法：
1、石斛滴眼液药学研究：①制作叠鞘石斛粉末水合氯醛装片，对其显微形态进行鉴别；②应用薄层色谱法对叠鞘石斛中石斛酚和丁香酸进行鉴别；③建立石斛酚和丁香酸的提取工艺；④建立高效液相色谱法对叠鞘石斛中石斛酚和丁香酸的含量进行测定；⑤建立石斛滴眼液制备工艺，并对其质量进行控制。
2、石斛滴眼液药效学研究：大鼠腹腔注射50%半乳糖并饮用5%半乳糖水溶液，造成大鼠白内障模型，并给药用裂隙灯显微镜观察大鼠晶状体浑浊情况。给药30d后处死大鼠取眼球做HE切片，观察晶状体皮质、上皮细胞。
3、石斛滴眼液药代动力学研究：新西兰兔眼滴入石斛滴眼液50μL，并于不同时间点处死，取出眼球分离出房水和角膜。建立高效液相色谱法测量石斛滴眼液中石斛酚和丁香酸的浓度，并计算其药代动力学参数。
4、石斛滴眼液安全性评价：①以最大耐受量法进行急性毒性实验，观察14 d内20只小鼠死亡数和质量变化；②兔敷贴滴眼液进行一次和多次给药皮肤刺激性实验，观察末次用药24 h后1h、24h、48h、72 h至一周的红斑和水肿情况；③一次和多次给药眼刺激实验，观察末次用药24 h后1h、24h、48h、72 h眼睛刺激情况；④将石斛滴眼液涂于豚鼠背部受试区，观察其过敏反应。
结果：
1、石斛滴眼液药学研究：叠鞘石斛粉末显微观察到螺纹导管、木纤维、上皮细胞、薄壁细胞、木薄壁细胞等叠鞘石斛粉末形态特征。叠鞘石斛TLC鉴别显示其有效成分石斛酚和丁香酸均与对照品在相同位置显蓝色。建立了HPLC法测定叠鞘石斛中石斛酚和丁香酸的含量，石斛酚和丁香酸分别占标示量的102.39%、102.43%，RSD均小于2.0%。石斛滴眼液制备工艺与质量控制研究显示：该滴眼液为无菌、渗透压为0.302 mOsmol·kg-1，粘度为1.13-1.16 mPa·s的淡黄色澄明溶液；其4℃下保存有效期为半年。
2、石斛滴眼液药效学研究：给药30天后，对大鼠晶状体浑浊度进行观察统计分析结果石斛滴眼液组与模型组A、与阳性组（吡诺克辛滴眼液）比较，P均小于0.05。HE切片观察药物组晶状体上皮细胞排列比阳性组和模型组A、B整齐，皮质空泡少。
3、石斛滴眼液药代动力学研究：建立了高效液相色谱法检测房水和角膜中石斛酚和丁香酸的含量。给药后，石斛酚在房水和角膜中药动学参数结果：t1/2β分别为42.5165h、33.0219h，t1/2α分别为1.2158h、0.32330h，Ka分别为1.7159h-1、2.69358h-1， Tmax分别为0.7260h、0.4587h，Cmax分别为21.0119mg·L-1、1.68030μg·g-1，AUC0-∞分别为1053.5495mg·h·L-1、68.6355μg·h·L-1。丁香酸在房水和角膜中的药动学参数结果：t1/2β分别2.2411h、6.4814h，t1/2α分别为0.1933h、0.3582h，Ka分别为3.7503h-1、4.5269h-1，Tmax分别为0.7404h、0.5020h，Cmax分别为0.12623mg·L-1、0.4974μg·g-1， AUC0-∞分别为0.5098 mg·h·L-1、3.1726μg·h·L-1。
4、石斛滴眼液安全性评价：小鼠急性毒性实验结果显示，14天内无小鼠死亡；表明石斛滴眼液的小鼠最大耐受剂量大于80 mL·kg-1，相当于石斛酚105.6 mg·kg-1，丁香酸100 mg·kg-1。石斛滴眼液用于新西兰兔皮肤，对完好皮肤无刺激性，对破损皮肤除去药物72h后也无刺激性；一次或多次给药对其完整皮肤无刺激性。石斛滴眼液对兔眼睛无刺激性。豚鼠皮肤过敏性实验中，生理盐水组和石斛滴眼液组在整个实验中未出现红斑及水肿，致敏率为0%；阳性对照组（1%2，4-二硝基氯苯乙醇溶液）有明显轻度红斑出现，及轻度水肿，致敏率为100%。
结论：
1、本文建立了叠鞘石斛及石斛滴眼液的质量控制方法，该方法方法操作简便、快速，结果准确；石斛滴眼液无菌检查、渗透压检查、粘度检查符合2010版《中华人民共和国药典》规定。
2、石斛滴眼液对大鼠糖性白内障具有良好的治疗作用。
3、石斛滴眼液单次滴兔眼后在房水、角膜中具有良好的药动学特征和组织通透性。
4、石斛滴眼液安全、有效，无不良反应，有良好的成药性。
糖尿病性白内障(diabetic cataract，DC)是糖尿病患者失明的主要原因之一，是晚期糖尿病患者常见的主要眼部并发症。目前治疗糖性白内障主要手段有药物治疗和手术治疗。但是手术治疗的局限性决定了其不能满足所有白内障患者的需求。因此，用药物来治疗和预防白内障便越来越多地被患者所接受。石斛为名贵传统中药，早有古籍记载其有滋阴补肾、明目强身的功效。本课题组前期从石斛中筛选出对糖性白内障具有预防和治疗作用的成分石斛酚和丁香酸，并对石斛酚和丁香酸抗糖性白内障的作用机制进行了研究。研究实验表明石斛酚和丁香酸对醛糖还原酶（AR）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）具有良好的抑制作用，具有抗高渗、抗氧化的作用；两者联用具有良好的协同作用。在此前提下，本研究首次以石斛酚和丁香酸为主要成分制成石斛滴眼液，并对其临床前进行初步研究，为其进一步推广和研究奠定基础。石斛滴眼液具有有效成分清楚、靶标明确、作用机制明晰等优点，有望开发为Ⅰ类抗DC新药，若能上市，将给广大患者带来福音。
目的：
对“石斛滴眼液”临床前质量控制、药效、药动学及安全性评价进行研究，为石斛滴眼液的临床研究奠定基础。
方法：
1、石斛滴眼液药学研究：①制作叠鞘石斛粉末水合氯醛装片，对其显微形态进行鉴别；②应用薄层色谱法对叠鞘石斛中石斛酚和丁香酸进行鉴别；③建立石斛酚和丁香酸的提取工艺；④建立高效液相色谱法对叠鞘石斛中石斛酚和丁香酸的含量进行测定；⑤建立石斛滴眼液制备工艺，并对其质量进行控制。
2、石斛滴眼液药效学研究：大鼠腹腔注射50%半乳糖并饮用5%半乳糖水溶液，造成大鼠白内障模型，并给药用裂隙灯显微镜观察大鼠晶状体浑浊情况。给药30d后处死大鼠取眼球做HE切片，观察晶状体皮质、上皮细胞。
3、石斛滴眼液药代动力学研究：新西兰兔眼滴入石斛滴眼液50μL，并于不同时间点处死，取出眼球分离出房水和角膜。建立高效液相色谱法测量石斛滴眼液中石斛酚和丁香酸的浓度，并计算其药代动力学参数。
4、石斛滴眼液安全性评价：①以最大耐受量法进行急性毒性实验，观察14 d内20只小鼠死亡数和质量变化；②兔敷贴滴眼液进行一次和多次给药皮肤刺激性实验，观察末次用药24 h后1h、24h、48h、72 h至一周的红斑和水肿情况；③一次和多次给药眼刺激实验，观察末次用药24 h后1h、24h、48h、72 h眼睛刺激情况；④将石斛滴眼液涂于豚鼠背部受试区，观察其过敏反应。
结果：
1、石斛滴眼液药学研究：叠鞘石斛粉末显微观察到螺纹导管、木纤维、上皮细胞、薄壁细胞、木薄壁细胞等叠鞘石斛粉末形态特征。叠鞘石斛TLC鉴别显示其有效成分石斛酚和丁香酸均与对照品在相同位置显蓝色。建立了HPLC法测定叠鞘石斛中石斛酚和丁香酸的含量，石斛酚和丁香酸分别占标示量的102.39%、102.43%，RSD均小于2.0%。石斛滴眼液制备工艺与质量控制研究显示：该滴眼液为无菌、渗透压为0.302 mOsmol·kg-1，粘度为1.13-1.16 mPa·s的淡黄色澄明溶液；其4℃下保存有效期为半年。
2、石斛滴眼液药效学研究：给药30天后，对大鼠晶状体浑浊度进行观察统计分析结果石斛滴眼液组与模型组A、与阳性组（吡诺克辛滴眼液）比较，P均小于0.05。HE切片观察药物组晶状体上皮细胞排列比阳性组和模型组A、B整齐，皮质空泡少。
3、石斛滴眼液药代动力学研究：建立了高效液相色谱法检测房水和角膜中石斛酚和丁香酸的含量。给药后，石斛酚在房水和角膜中药动学参数结果：t1/2β分别为42.5165h、33.0219h，t1/2α分别为1.2158h、0.32330h，Ka分别为1.7159h-1、2.69358h-1， Tmax分别为0.7260h、0.4587h，Cmax分别为21.0119mg·L-1、1.68030μg·g-1，AUC0-∞分别为1053.5495mg·h·L-1、68.6355μg·h·L-1。丁香酸在房水和角膜中的药动学参数结果：t1/2β分别2.2411h、6.4814h，t1/2α分别为0.1933h、0.3582h，Ka分别为3.7503h-1、4.5269h-1，Tmax分别为0.7404h、0.5020h，Cmax分别为0.12623mg·L-1、0.4974μg·g-1， AUC0-∞分别为0.5098 mg·h·L-1、3.1726μg·h·L-1。
4、石斛滴眼液安全性评价：小鼠急性毒性实验结果显示，14天内无小鼠死亡；表明石斛滴眼液的小鼠最大耐受剂量大于80 mL·kg-1，相当于石斛酚105.6 mg·kg-1，丁香酸100 mg·kg-1。石斛滴眼液用于新西兰兔皮肤，对完好皮肤无刺激性，对破损皮肤除去药物72h后也无刺激性；一次或多次给药对其完整皮肤无刺激性。石斛滴眼液对兔眼睛无刺激性。豚鼠皮肤过敏性实验中，生理盐水组和石斛滴眼液组在整个实验中未出现红斑及水肿，致敏率为0%；阳性对照组（1%2，4-二硝基氯苯乙醇溶液）有明显轻度红斑出现，及轻度水肿，致敏率为100%。
结论：
1、本文建立了叠鞘石斛及石斛滴眼液的质量控制方法，该方法方法操作简便、快速，结果准确；石斛滴眼液无菌检查、渗透压检查、粘度检查符合2010版《中华人民共和国药典》规定。
2、石斛滴眼液对大鼠糖性白内障具有良好的治疗作用。
3、石斛滴眼液单次滴兔眼后在房水、角膜中具有良好的药动学特征和组织通透性。
4、石斛滴眼液安全、有效，无不良反应，有良好的成药性。