【摘 要】
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目的克隆人亲磷脂酸磷脂酶A1(PA-PLA1)β亚型基因,分析该酶基因及其蛋白质的序列特征,构建PA-PLA1β亚型基因真核表达载体,为该酶生理功能的研究提供实验依据。方法从人的肾
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目的克隆人亲磷脂酸磷脂酶A1(PA-PLA1)β亚型基因,分析该酶基因及其蛋白质的序列特征,构建PA-PLA1β亚型基因真核表达载体,为该酶生理功能的研究提供实验依据。方法从人的肾脏组织中提取总RNA,逆转录制备cDNA,扩增人PA-PLA1β亚型基因并克隆测序。以Vector NTI8.0、DNASTAR、ORF finder分析所克隆的人PA-PLA1β亚型基因及其蛋白质序列。构建真核表达载体pcDNA3.1-PA-PLA1(β亚型),测序证实后转染小鼠分泌胰岛素细胞株MIN6,以Western blot检测PA-PLA1β亚型蛋白的表达水平。结果人PA-PLA1β亚型基因mRNA全长为2938bp,编码区长2121bp,编码一个由608个氨基酸残基组成的蛋白多肽,分子量为83141道尔顿,等电点为5.64。序列比对表明所克隆的人PA-PLA1β亚型基因与牛PA-PLA1基因同源,并与KIAA0725蛋白及P125蛋白高度相似。系统发生分析结果显示PA-PLA1β亚型与KIAA0725蛋白及P125蛋白在脂肪酶基因家族中形成亚家族。测序结果证实所构建的真核表达载体正确,Western blot检测表明该表达载体可在MIN6细胞中过表达PA-PLA1蛋白。结论所克隆的人PA-PLA1β亚型为已经报道的牛PA-PLA1的同源基因,与KIAA0725蛋白及P125蛋白高度相似,均为细胞内磷脂酶。所构建的PA-PLA1β亚型基因真核表达载体能在MIN6细胞中过表达PA-PLA1蛋白。
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