成骨生长肽抗体的制备及其对NIH3T3细胞促增殖作用机理

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成骨生长肽(OGP)是从损伤后再生的骨髓培养基质中分离纯化所得的一种具有14个氨基酸的小分子多肽。OGP广泛存在于哺乳动物的血清中,进化上高度保守,因此具有很好的同源性。研究发现OGP及其C端5肽可以促进造骨和造血作用。对体外培养的MC3T3E1成骨细胞、NIH3T3成纤维细胞和成骨性Ros17/2细胞等均有促增殖和分化作用。但目前,OGP的细胞作用机理还不明确。为此,本实验采用中科院生化所人工合成的sOGP,设计poly-OGP制备OGP抗体,观察sOGP对NIH3T3细胞的促增殖作用,并利用制备抗体的免疫分析法及其他技术探讨OGP及其C端5肽对NIH3T3细胞的增殖作用机理。 通过实验得出结论:Ploy-OGP免疫动物可以得到更单一及成本更低廉的抗血清。MTT法和细胞计数法是较好的测定增殖的方法。细胞周期分析及Ⅰ型胶原RT-PCR法及ELISA法测定,可以提供更多的增殖信息。sOGP(14肽及5肽)可在低浓度下通过对OGP的正反馈作用促进NIH3T3细胞增殖。OGP可能通过Gi偶联的促有丝分裂蛋白激酶系统起作用。
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