枣叶5种内生细菌鉴定与生防作用研究

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近年来,新疆南疆地区枣黑斑病严重影响新疆红枣品质与产量,化学防治易造成农药残留和再猖獗等不利影响。生物防治符合环境保护、食品安全和人类健康的需要,是化学杀菌剂的理想替代品,获得高效生防菌是生物防治的基础。植物内生细菌能够促进植物生长和抑制病原菌,是优秀的生物资源库。本研究以枣叶片为材料,分离内生细菌进行培养,确定新疆南疆枣叶内生细菌的分类地位,筛选具有抑菌活性的内生细菌,探究内生细菌对病原菌产生抑制的原因,为枣内生细菌作为微生物菌剂的开发和利用提供理论依据,为果树病害的生物防治奠定基础。本研究主要内容和结果如下:1.利用平板划线法等手段,从健康枣叶片组织中分离得到内生细菌。依据菌落颜色、形状、大小、光泽、透明度、边缘是否整齐等特征进行归类合并,共计得到5株外观形态不同的内生细菌。结合形态学、生理生化试验和分子生物学方法进行鉴定:菌株ju01为Kocuria oceani;菌株ju02为Kocuria rosea;菌株ju03、ju04为Arthrobacter oryzae;菌株ju05为Chryseobacterium indologenes。2.将5株枣叶内生细菌利用平板对峙法、孢子萌发抑制法等对枣黑斑病菌(Alternaria alternata)、核桃黑斑病菌(Alternaria alternata)、核桃腐烂病菌(Cytospora Chrysosperma)、苹果腐烂病菌(Valsa mali)、梨黑斑病菌(Alternaria tenuissima)进行抑菌试验,结果表明除ju01、ju02、ju03、ju04菌株对核桃腐烂病没有拮抗作用,ju05菌株对苹果腐烂病没有拮抗作用,内生菌株对其余靶标病原真菌均有一定不同程度的拮抗作用,抑菌率在50.42%~79.83%之间。抑制病原菌分生孢子萌发方面,5株内生细菌在4h、14h、24h时,均具有不同程度抑制枣黑斑病分生孢子萌发效果,ju01菌株在24h时抑制分生孢子萌发效果最好,抑制率达60.75%。通过观察病原菌菌丝生长变化,发现ju01、ju03、ju04、ju05菌株对靶标病原菌丝有破坏作用,使正常生长的菌丝产生变细、畸变、裂解等。3.通过LC-MS(液相色谱质谱联用)对5株内生细菌代谢产物进行检测与分析,检测结果表明,5株内生细菌产生具有抑菌活性的代谢产物,证明5株内生细菌作为开发微生物菌剂具有可行性,在生物防治领域具有很大的开发和应用价值。
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