桔梗、五味子多糖的分离纯化及活性研究

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本课题通过单因素试验和四因素三水平[L9(34)]的正交试验,确定了桔梗粗多糖和五味子粗多糖的最佳提取方法,并在此基础上,用sevag法除蛋白杂质,透析袋除小分子杂质,利用柱层析法进一步分离纯化多糖,最终得到分子量均一的桔梗多糖PRPS-a,PRPS-b和PRPS-c以及五味子多糖ASPS-a-1,ASPS-b-2和ASPS-b-3。本课题从体内和体外两个方面研究和探讨了桔梗多糖的抗哮喘活性。在体内实验中,以卵蛋白诱导的哮喘大鼠为模型,应用不同浓度的桔梗多糖进行干预,测定哮喘大鼠体内的炎性细胞、细胞因子和炎症介质含量的变化,进而观察桔梗多糖对哮喘大鼠的治疗作用。体外实验中,将桔梗多糖PRPS-a,PRPS-b,PRPS-c作用于ET-1致敏的人气道平滑肌细胞(HASMCs)增殖模型,观察它们对其增殖的作用。本课题系统考察了五味子多糖的抗肝损伤活性及抗氧化活性。选取肝指数,胸腺指数,脾指数,血清ALT,AST,ALP,Alb,T-AOC等为观察指标,探究了五味子多糖对CCl4所致小鼠急性肝损伤的影响;并对肝组织中MDA,SOD,NO及肝脏组织病理学变化进行了相关研究。在抗氧化实验中,较为系统探究了五味子多糖ASPS-a-1,ASPS-b-2和ASPS-b-3对DPPH、羟自由基、超氧阴离子的清除作用及金属螯合能力。实验结果表明,桔梗多糖可显著抑制哮喘大鼠Eotaxin1和ICAM-1的表达,减少血液及气道内EOS数量及百分比,显著降低哮喘大鼠血清和BALF中IL-4含量,升高IFN-γ含量,并能够有效的抑制HASMCs的增殖。由此提示,桔梗多糖抗哮喘机制可能与其通过调节哮喘Thl/Th2失衡,进而影响细胞因子的分泌而抑制HASMCs的增殖,使之具有较强的抗哮喘活性有关。五味子多糖能够减轻肝组织增重,增加Alb含量和提高T-AOC、SOD活性,降低肝组织中MDA的含量,降低NO的活性,减轻肝细胞肿胀、脂肪变、炎细胞浸润的程度,并具有抗氧化活性和金属螯合能力,这提示五味子多糖能够通过清除自由基、抑制其生成来保护肝脏,从而减少CCl4对肝脏造成的损伤。本课题以我国传统中药桔梗和五味子的多糖为研究对象,在确定其提取分离和纯化工艺的基础上,较系统的研究了它们的理化性质及相关药效活性。实验结果表明,桔梗多糖具有抗哮喘活性;五味子多糖具有抗肝损伤活性。依据国家科技部“重大新药创制”的理念,本研究结果,力求为建立中药药效物质基础及物质资源库提供桔梗和五味子多糖的较系统基础研究资料,为桔梗多糖成为防治哮喘有效药物,五味子多糖成为保肝药物及抗氧化制剂提供理论依据。
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