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背景:良性胆道狭窄(Benign biliary stricture,BBS)是由于各种良性疾病导致的胆管腔疤痕性缩窄。成纤维细胞过度增殖和细胞外基质过度沉积,成纤维细胞转化为肌成纤维细胞及成纤维细胞功能异常是重要原因,α平滑肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)是成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的标志,转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)是重要的因素,其中P311基因和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)在皮肤损伤修复及疤痕形成过程中起重要作用,但是,P311及TNF-α在BBS形成过程中的作用未见报道。川芎嗪(Tetramethylpyrazine,TMP)通过抑制成纤维细胞的过度增殖及细胞外基质的过度沉积等方式抑制器官纤维化。地塞米松(Dexamethasone,DEX)已被用于治疗皮肤疤痕性疾病,但两者对胆管成纤维细胞相关基因及BBS形成过程有否作用不清楚。本论文分三部分探索BBS形成的机理及其TMP、DEX对BBS形成的影响:1.BBS模型胆管成纤维细胞(MF)及正常胆管成纤维细胞(NF)P311、TGF-β1、α-SMA基因的表达及其TMP、DEX的影响;2.NF经TNF-α干预后P311、TGF-β1、α-SMA基因的表达及其TMP、DEX的影响;3.不同时间(1W,3W,6W)BBS模型胆管组织TGF-β1、α-SMA、P311基因的表达及其TMP、DEX的影响。方法:1.对家兔胆总管采用切开再吻合的方法建立BBS模型,1周后分别取BBS模型胆道疤痕组织及正常胆道组织分别培养MF和NF,分别分为NF、MF、MF+TMP、MF+DEX和MF+TMP+DEX等组。用CCK-8法测定各组细胞增殖水平,real-time PCR检测各组细胞P311、TGF-β1及α-SMA基因m RNA表达水平,Western blot检测各组细胞TGF-β1及α-SMA蛋白表达水平。2.采用TNF-α干预NF,分别分为NF、NF+TNF-α、NF+TNF-α+TMP、NF+TNF-α+DEX和NF+TNF-α+TMP+DEX等组,用CCK-8法测定各组细胞增殖水平,real-time PCR检测各组细胞TGF-β1、α-SMA及P311基因m RNA表达水平,Western blot检测各组细胞TGF-β1及α-SMA蛋白表达水平。3.使用78只家兔,按照上述方法复制BBS模型,分为正常对照、BBS模型、BBS模型+TMP、BBS模型+DEX和BBS模型+TMP+DEX等组,再根据不同时间(1W、3W、6W)分为不同亚组。用real-time PCR检测各组胆管组织TGF-β1、α-SMA及P311基因m RNA表达水平,Western blot检测各组胆管组织TGF-β1及α-SMA蛋白表达水平。结果:1.MF组中存在P311基因并明显过度表达(P<0.05),并与TGF-β1和α-SMA的过表达呈正相关关系,相关系数R分别为0.801及0.904(P<0.01);MF增殖显著;TMP、DEX及两者联合均明显抑制NF/MF的增殖及细胞中P311、TGF-β1、α-SMA基因m RNA及蛋白表达(P<0.05);相同浓度的TMP、DEX及两者联合对MF的抑制作用较NF强(P<0.05);联合用药比单一种药物作用更明显;2.TNF-α可刺激NF增殖加速及上调该细胞P311、TGF-β1、α-SMA基因m RNA及蛋白表达(P<0.05),TNF-α的刺激作用使这三种基因表达量和细胞增殖量达到MF上述指标的58.77%-96.56%;TNF-α对胆管成纤维细胞的调控作用可被TMP及DEX明显抑制(P<0.05),联合用药比单一种药物抑制作用更显著。3.胆管疤痕模型组织中存在P311基因并明显过度表达(P<0.05),并与TGF-β1和α-SMA的过表达呈正相关关系,相关系数分别为0.905及0.916(P<0.01);不同时间(1W,3W,6W)BBS模型组织中TGF-β1、α-SMA、P311基因m RNA及蛋白持续过表达;TMP、DEX及两者联合对BBS模型胆管组织TGF-β1、α-SMA、P311基因m RNA及蛋白表达均具有明显下调作用(P<0.05),以联合用药更为显著。结论:1.MF及疤痕模型胆管组织存在P311基因并明显过度表达,并与TGF-β1和α-SMA的过表达呈正相关关系,其可能是BBS形成的主要调控基因。2.TNF-α刺激NF的P311、TGF-β1、α-SMA基因mRNA/蛋白过度表达及成纤维细胞增殖明显,其量占MF上述指标的一半以上,是刺激BBS形成的主要细胞因子。3.胆管疤痕组织中P311等基因m RNA及蛋白在胆管吻合术后1-6周期间仍持续高表达,提示在吻合口愈合后期预防使用抗疤痕药物对防治BBS可能仍然是有帮助的。4.TMP及DEX均能明显抑制胆管成纤维细胞及组织中这三种基因或蛋白的高表达,也可显著抑制细胞增殖,两种药物联合作用比单一药物作用显著增强,可能对预防BBS形成有重要作用。