针刺对缺血损伤脑组织保护机制相关信号蛋白磷酸化作用的研究

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目的:采用蛋白芯片技术观察针刺督脉经(穴)对脑组织损伤修复相关信号蛋白磷酸化的变化,全面揭示与上述过程有关的信号分子及通路,从蛋白组学角度阐明针刺督脉经(穴)对脑组织缺血性损伤的修复机制,从而丰富经脉-脏腑相关的内涵,进一步了解针刺治疗脑缺血的机理,为针刺临床应用提供一定理论依据。方法:40只SD健康大鼠随机分为4组,即假手术组、模型组、对照点组、穴位组,10只/组;本研究分为二个部分,第一部分:采用线栓法制备脑缺血大鼠模型,行神经功能缺损评分以验证模型成功与否,处死前再次行神经功能缺损评分,处死后行TTC染色观察大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion MCAO)大鼠的梗死面积。第二部分:提取缺血脑组织细胞,采用720磷酸化抗体蛋白芯片技术检测针刺治疗后的脑组织损伤修复相关信号蛋白磷酸化的变化,筛选出各组差异性表达的蛋白。结果:1.与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分、梗死面积比明显增高,差异具有非常显著性意义(P<0.01),而对照点组、穴位组能不同程度地降低神经功能缺损评分,减少梗死面积(P<0.01 vs P<0.05),且穴位组效果优于对照点组(P<0.05)2.缺血脑组织细胞720抗体蛋白芯片结果显示:与假手术组比较,模型组的蛋白磷酸化水平变化大于1.5倍的蛋白中有48种出现上调,29种出现下调;与模型组比较,穴位组蛋白磷酸化水平变化大于1.5倍的蛋白中有29种出现上调,51种出现下调,对照点组则有35种出现上调,24种出现下调;与对照点组比较,穴位组的磷酸化水平差异蛋白在蛋白数量、蛋白功能种类与信号转导通路的归属上均明显优于对照点组。结论:本实验从“针刺-效应-机制”思路出发,采用蛋白芯片技术检测针刺促缺血脑组织修复过程中相关蛋白磷酸化的表达,观察针刺督脉(穴)对脑缺血损伤与保护作用,进一步丰富经脉(督脉)—脏腑(奇恒之腑脑)内涵,结论如下:1.针刺大椎、百会、人中(穴)能明显改善MCAO大鼠的神经功能缺损,促梗死面积缩小。提示针刺大椎、百会、人中(穴)能明显减轻脑损伤,从而实现缺血性脑损伤的保护作用;2.针刺大椎、百会、人中(穴)可调整造模后失调的与凋亡有关蛋白的磷酸化水平,此外,还可调整涉及多个其它功能种类的蛋白,且涉及到的信号转导通路归属于细胞周期信号转导通路、MAPK信号途径、细胞凋亡信号途径、黏附分子信号途径、非受体酪氨酸激酶信号途径、受体酪氨酸激酶信号途径等多条信号转导通路。提示多靶点、多途径与多条信号转导通路激活是针刺大椎、百会、人中(穴)促缺血性脑损伤修复的重要特征;3.与对照点组比较,穴位组能特异性激活MAPK多条平行信号转导通路,抑制细胞凋亡、挽救缺血半暗带、实现脑保护,提示大椎、百会、人中(穴)在针刺促缺血性脑损伤修复中具有一定的经穴特异性;4.针刺大椎、百会、人中(穴)促缺血性脑损伤修复过程中激活多种功能类型蛋白,对机体的多种生理功能进行调节;多条信号转导通路的激活,可对缺血性脑损伤的修复实现多靶点、多途径与多条信号的调整,该作用特点符合针刺“综合性”调整作用的基本特点。采用蛋白芯片技术观察脑组织蛋白表达的变化,探讨针刺对机体的整体调节作用,对阐释中医整体观的认识具有一定的促进作用。
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