TRAIL与顺铂联合应用诱导人胃癌细胞凋亡的研究

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目的:证实TRAIL与低剂量顺铂联合应用具有协同作用,可使胃癌细胞对TRAIL的敏感性显著提升,并进一步探讨其作用机制。方法:选取胃癌细胞株SNU216为研究对象,将TRAIL分为不同浓度组(10、30、100、300、1000ng/ml)分别给药,通过MTT法检测,从而测得细胞的生存率。再将不同浓度顺铂(0.625、1.25、2.5、5、10μg/ml)分别作用于细胞后测其生存率,然后将常用剂量TRAIL(100ng/ml)分别作用于上述不同浓度的顺铂组中,检测细胞生存率,从而探讨TRAIL与顺铂联合应用后对细胞生存率的影响。利用Westernblot检测细胞内是否发生了Caspase级联反应,从而探讨二者作用后是否引起细胞凋亡。最后利用Westernblot法检测细胞死亡受体的变化,来揭示其作用机制。结果:首先我们发现胃癌细胞系SNU216细胞对TRAIL单独作用耐受,10ng/ml、30ng/ml、50ng/ml、100ng/ml和1000ng/ mlTRAIL作用后,SNU216细胞生存率分别为101.87±2.12%、100.96±1.62%、99.70±1.21%、99.33±1.30%和98.48±1.67%,可见SNU216对TRAIL耐受。单独应用顺铂,浓度为0.625μg/ml、1.25μg/ml、2.5μg/ml、5.0μg/ml、10.0μg/ml作用于SNU216后,其细胞生存率分别为100.29±1.34%、98.89±1.34%、95.24±1.72%、86.96±1.51%、76.44±1.52%。再将常用治疗剂量的TRAIL100 ng/ml分别加入上述浓度组的顺铂中,联合作用于SNU216,其细胞生存率分别为99.80±1.37%、85.44±1.30%、60.79±1.55%、58.73±1.05%、41.63±1.51%,可见在单独应用顺铂组,小剂量顺铂(小于1.25μg/ml)并未引起细胞明显凋亡,而联合应用组中,小剂量顺铂(小于1.25μg/ml)与TRAIL作用于胃癌细胞SNU216后具有明显的协同效应,二组数据具有显著差异(P<0.05)。通过Westernblot法检测发现二者合用后使细胞内放生了Caspase级联反应,从而证实二者合用是通过引起细胞凋亡而起到抑癌作用,而二者合用后的DR5表达上调,考虑是引起其凋亡的机制。结论:TRAIL单独用药在胃癌细胞上作用有限,顺铂预先处理再与TRAIL联合应用在诱导胃癌细胞凋亡上具有显著的协同作用,而且TRAIL可增加小剂量顺铂对细胞的杀伤作用。并且发现二者合用后激活了Caspase级联反应,从而引起细胞凋亡。其机制可能是与上调了SNU216表面的死亡受体DR5有关。
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