丙型肝炎病毒(HCV)为单股正链RNA病毒,基因组大小约9.4kb。HCV感染后引起慢性肝炎,甚至肝硬化、肝癌。HCV基因组仅有一个开放阅读框,编码一个由3010到3033个氨基酸组成的多聚蛋白,通过细胞和病毒的蛋白酶切割,形成结构蛋白和非结构蛋白。其中非结构蛋白NS5A在HCV的致病过程中发挥重要作用。NS5A基因位于6258—7601 nt之间,编码分子量为56 kD的NS5A蛋白,位于细胞浆内。NS5A蛋白具有多种生物学功能,参与HCV多聚蛋白的成熟和RNA的复制过程;作为转录激活因子,影响细胞信号转导途径,激活多种病毒及细胞的启动子,调控细胞、病毒基因表达,调节细胞生长、凋亡以及免疫等,与感染HCV的细胞发生恶性转化过程密切相关。NS5ATP9是HCV NS5A反式激活的靶蛋白,它与细胞的凋亡、增殖及肝纤维化发生发展密切相关。为探讨HCV NS5A对细胞内NS5ATP9表达的影响,以及外源性NS5ATP9表达对肝细胞增殖和细胞周期的影响,本研究应用分子生物学技术,分别将重组质粒pcDNA3.1、pcDNA3.1-NS5A和pcDNA3.1-NS5ATP9转染HuH-7和HepG2细胞,经G418筛选,获得稳定转染的细胞克隆。采用实时定量PCR检测NS5ATP9 mRNA表达,结果表明,与对照组比较,转染pcDNA3.1-NS5A的肝细胞,NS5ATP9 mRNA表达水平显著提高;发现转染pcDNA3.1-NS5ATP9的肝细胞,通过流式细胞术检测细胞周期发现S期细胞数量显著增加,通过活细胞发光法发现显著促进肝细胞增殖。研究结果为进一步研究NS5A和NS5ATP9的相互作用及其对肝细胞细胞生物学的影响奠定基础。