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目的：1.观察在脂多糖激活原代培养大鼠小胶质细胞模型中，TNFα和HMGB1蛋白表达及TNFα mRNA和HMGB1mRNA表达的时间依赖性。2.观察NF-κ抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)和p38MAPK抑制剂SB203580对体外TNFα诱导的原代培养大鼠小胶质细胞HMGB1蛋白表达及mRNA的影响。3.观察鞘内注射Etanercept对坐骨神经慢性挤压伤(CCI)大鼠痛阈和脊髓小胶质细胞活性、NF-κBp-p65、P-p38MAPK、HMGB1表达的调节，并探讨其临床疼痛治疗的机制。
方法：1.用脂多糖(100ng/ml)刺激原代培养大鼠小胶质细胞，根据不同的指标设定取样时间点(0h，2h，4h，6h，8h，12h，16h，18h，24h)，用ELISA法检测相应时间点细胞培养上清中TNFα和HMGB1表达情况，用Western Blot检测细胞裂解液HMGB1表达情况，用RT-PCR检测TNFα mRNA和HMGB1 mRNA的表达。2.采用原代培养大鼠小胶质细胞，设立两部分，分别用PDTC和SB203580处理。第一部分设立对照组、TNFα(25ng/ml)组、TNFα+PDTC组、PDTC组，第二部分设立对照组、TNFα组、TNFα+SB203580组、SB203580组，均孵育16h后分别用ELISA法检测细胞培养上清中HMGB1表达情况、Western blot检测细胞HMGB1、NF-κBp-p65和P-p38MAPK表达情况，用RT-PCR检测HMGB1 mRNA表达。3.252只成年雄性SD大鼠，体质量250～300g，鞘内置管成功后，随机分为7组(n=36)：正常对照组：实验大鼠不做任何处置；假手术组：仅暴露左侧坐骨神经不结扎；假手术+Etanercept组：假手术处理大鼠并经鞘内置管注入Etanercept组；CCI组：大鼠CCI手术处理；CCI+Etanercept组。鞘内置管3 d后按每组处理不同，开始鞘内输注生理盐水和Etanercept，每2d鞘内给药一次，鞘内注射2 d后分别建立大鼠CCI神经病理性疼痛模型和假手术模型，测定大鼠的痛敏值，并在CCI后第3，7，13天处死大鼠，取脊髓腰膨大部进行免疫组化测定OX42表达、用Western Blot检测HMGB1、NF-κBp-p65和p-p38MAPK表达情况，用RT-PCR检测HMGB1 mRNA表达。
结果：1.LPS刺激后大鼠小胶质细胞形态呈巨噬细胞样变化；TNFα的分泌于8h达峰值，细胞内及细胞外HMGB1的分泌分别于18h和24h达峰值，TNFα mRNA的表达于2h即达峰值，HMGB1mRNA自8h开始增加，12h达峰值。2.TNFα刺激后大鼠小胶质细胞裂解液及上清液中均有HMGB1蛋白表达增高，PDTC可抑制TNFα诱导的NF-κBp-p65核表达，并下调HMGB1蛋白和HMGB1mRNA的表达；SB203580可抑制TNFα诱导的p-p38MAPK表达(P<0.01)，同样下调HMGB1蛋白和HMGB1mRN的表达。3.CCI组与Sham组比较大鼠术后各时点痛敏阈值明显下降，并在术后第3d降至最低点(P<0.01)，脊髓OX42、p-p65、p-p38MAPK的表达明显升高(P<0.01)，HMGB1mRNA的表达从3d开始表达上调，7d达峰值，HMGB1蛋白表达于7d开始增加，持续增长至13d。Etanercept+CCI组与CCI组比较，术后各时点大鼠痛敏阈值增高，脊髓OX42、p-p65、p-p38MAPK、HMGB1的表达下降(P<0.01)。
结论：1.LPS可激活小胶质细胞，改变细胞形态，增加细胞TNFα和HMGB1蛋白和mRNA的表达2.TNFα可增加小胶质细胞释放晚期炎症因子HMGB1蛋白和mRNA的表达，NF-κB和p38MAPK可能与其激活释放HMGB1的细胞信号分子机制有关。3.鞘内给予Etanercept可减轻CCI大鼠的病理性疼痛，并抑制脊髓小胶质细胞活性，下调P-p65、P-p38MAPK、HMGB1的表达，这可能是Etanercept治疗慢性神经病理性疼痛的机制之一。