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目的:利用DNA条形码技术建立河鲀鱼物种溯源鉴定的方法,建立河鲀毒素（TTX）超高效液相色谱-串联质谱检测法（UPLC-MS/MS）,对所收集河鲀鱼样品进行物种鉴定和毒素检测,以期实现基因-鱼种-毒素的有效链接,为河鲀鱼食物中毒快速溯源、鉴定与临床治疗提供技术支持。方法:1.河鲀鱼样品收集及形态学鉴定:委托海洋生物学专家在2019年秋季至2020年春季于中国黄海、东海及南海海域收集河鲀鱼并通过形态学特征进行河鲀鱼物种鉴定。2.DNA条形码技术在河鲀鱼物种鉴定中的应用:对所收集样品进行充分清洗,将鱼体分解成皮肤、肌肉、肝脏和卵巢等部分,各组织充分均质后装入清洁容器内,编码标记分装储存以备用。取50 mg河鲀鱼肌肉组织样品,利用试剂盒法提取DNA、PCR扩增线粒体COI基因,产物纯化并测序。利用MUSCLE算法进行序列比对,人工删减后得到该基因5’端655bp的序列,使用BLASTN工具进行序列比对以确定鱼种。将所得序列利用K2P替代模型构建邻接树,进行初步的系统发育分析以确定科属。制备模拟胃液,取均质肌肉组织1.0 g于5.0 m L模拟胃液中并置于37℃水浴恒温环境中反应,考察该技术在河鲀鱼中毒毒物溯源中的实用性。3.河鲀毒素UPLC-MS/MS检测方法的建立:参照国家标准（GB 5009.206-2016）的液相色谱-串联质谱法并结合实验室条件对色谱柱进行调整。3.1仪器检测方法:选取Waters ACQUITY UPLC BEH Amide（100 mm×2.1 mm,1.7μm）亲水色谱柱作为分离柱,流动相分别为乙腈及含5 mmol/L乙酸铵的0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱8 min,以电离子喷雾源、选择反应监测（SRM）正离子模式进行监测分析。以保留时间定性,外标法定量。3.2 TTX分离提取方法:准确称取3.00 g均质组织样品,利用乙酸甲醇（1:99,v/v）溶液作为提取溶剂在50℃水浴超声环境中提取20 min,离心后取上清液,重复操作一次。调节所得上清液酸碱度为p H 6.5～7.5,过TTX免疫亲和柱净化,一级水淋洗,乙酸甲醇（2:98,v/v）溶液洗脱。洗脱液经氮气吹干后,用0.1%甲酸水-乙腈溶液（1:1,v/v）复溶,超声,过0.22μm有机相微孔滤膜后上机分析。3.3方法学评价:对建立的方法进行线性关系、相关系数、稳定性、出峰时间和重现性验证,确定方法的检测限,计算TTX的回收率与精密度。3.4样品检测:采用上述所建方法对所有河鲀鱼样品的TTX含量进行检测。结果:1通过形态学鉴定,初步确定共收集到3科6属18种46尾河鲀鱼样品。2利用DNA条形码对样品物种进行鉴定,确定了所收集46尾河鲀鱼分属于3科7属19种。所有河鲀鱼样品在邻接树上按物种名称聚类,属内形成的分支具有较高支持率,与形态学鉴定结果大部分一致。经模拟胃液消化的河鲀鱼肌肉组织残渣中均扩增出线粒体COI基因,在对该基因进行纯化及测序后,其物种比对结果与未消化样品基因序列的物种比对结果完全一致。3所建立的UPLC-MS/MS方法对于TTX检测的检出限为1μg/kg,定量限为3μg/kg,标准工作曲线相关系数为0.99981,精密度为0.16%～9.52%,加标回收率为86.72%～104.39%。所有河鲀鱼样品中均有TTX检出,皮肤毒素含量以巴布亚尖鼻鲀C.papua（86277.51μg/kg）最高,蓝带箱鲀O.solorensis（101.46μg/kg）最低;肌肉毒素含量以星点东方鲀T.niphobles（104335.80μg/kg）最高,蓝带箱鲀O.solorensis（87.45μg/kg）最低;肝脏毒素含量以铅点东方鲀T.alboplumbeus（75107.21μg/kg）最高,无斑箱鲀O.immaculatus（45.31μg/kg）最低;卵巢毒素含量以纹幅叉鼻鲀A.hispidus（88335.30μg/kg）最高,暗纹东方鲀T.obscurus（73.55μg/kg）最低。东方鲀属（Takifugu）属内平均毒素含量相对最高的是星点东方鲀T.niphobles（81904.41μg/kg）,而黄鳍东方鲀T.xanthopterus（2115.38μg/kg）的毒素含量相对最低;扁背鲀属（Canthigaster）3种河鲀鱼的平均毒素含量相对最高的是巴布亚尖鼻鲀C.papua（81874.89μg/kg）;箱鲀属（Ostracion）属内4种河鲀鱼体内毒素的平均含量以粒突箱鲀O.cubicus（5733.74μg/kg）相对最高;叉鼻鲀属（Arothron）属内3种河鲀鱼的毒素平均含量以纹腹叉鼻鲀A.hispidus（73996.97μg/kg）毒素含量相对最高。结论:本研究利用DNA条形码技术以线粒体COI基因5’端655bp序列建立溯源鉴定常见河鲀鱼物种的方法,该方法具有痕量、高效和准确等优点。所建立的河鲀毒素UPLC-MS/MS检测方法的信噪比、灵敏度较高,可以实现高通量分析和痕量检测。用两种方法对所收集常见河鲀鱼样本进行物种鉴定及TTX含量、分布检测分析,实现了基因-鱼种-毒素的有效链接,为河鲀鱼物种信息及毒素含量数据库的建立奠定了基础。