【摘 要】
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目的：采用CIA为RA的动物模型，观察EIGCG的治疗作用。采用细胞学和分子生物学方法在细胞和蛋白分子水平分析EGCG对细胞的毒性和免疫调节机制。方法：①采用细胞毒性试验观察EGcG对L929细胞毒性。②给予C队小鼠EGCG治疗。以PBS作为阴性对照，观察各组小鼠的发病情况；对CIA小鼠进行关节评分和关节病灶病理学检测(HE染色)判断EGCG的治疗作用。③通过同位素掺入实验，在体内和体外研究EGC
【机 构】
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上海市光华中西医结合医院(200052) 上海市免疫研究所
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目的：采用CIA为RA的动物模型，观察EIGCG的治疗作用。采用细胞学和分子生物学方法在细胞和蛋白分子水平分析EGCG对细胞的毒性和免疫调节机制。
方法：①采用细胞毒性试验观察EGcG对L929细胞毒性。②给予C队小鼠EGCG治疗。以PBS作为阴性对照，观察各组小鼠的发病情况；对CIA小鼠进行关节评分和关节病灶病理学检测(HE染色)判断EGCG的治疗作用。③通过同位素掺入实验，在体内和体外研究EGCG对CIA小鼠CII特异性T细胞的增殖作用来阐明EGCG的治疗作用。④通过ELISA检测法，体内、体外研究EGCG对CIA小鼠脾细胞Th1型细胞因子及Th2型细胞因子的分泌水平，探讨EGCG是否通过调节Th1/Th2平衡和抑制促炎细胞因子TNF-α发挥治疗作用。⑤通过Annexin V和PI染色，FACS检测，研究EGCG是否通过诱导CII特异性T细胞凋亡而达到治疗CIA效果。⑥采用流式细胞检测技术观察EGCG对CIA小鼠脾细胞和淋巴结细胞分泌IL-17的影响。⑦采用流式细胞检测技术观察EGCG对诱导CIA小鼠脾细胞和淋巴结细胞Foxp3表达的影响。⑧采用Western-blot方法检测EGCG对IB、磷酸化IB蛋白水平的影响。
结果：①EGCG对L929细胞无明显毒性。②EGCG能够改善CIA的关节评分和关节组织的病理改变，EGCG组关节评分为(1.00±0.58)分，与Control组(3.58±0.45)分相比显著改善(P<0.05)。③在体内和体外实验中EGCG能抑制CIA小鼠T细胞的增殖(3366±199)、(5300±330)和Th1型细胞因子IFN-γ(145.2±8.06)pg·ml-1、(50±5)pg·ml-1和促炎因子TNF-α(369.2±15.4)pg·ml-1、(86.67±5)pg·ml-1分泌与Control组(5342±112)pg·ml-1、(8220±450)pg·ml-1；IFN-γ(274.2±33.87)pg·ml-1、(77.5±5)pg·ml-1；TNF-α(508±43)pg·ml-1、(118.3±4)pg·ml-1相比有显著差异(P<0.05)，对IL-4水平无影响。④EGCG对诱导CIA小鼠T细胞凋亡与对照组相比无明显差异。⑤EGCG对CIA小鼠淋巴结分泌IL-17有抑制作用，但对小鼠脾细胞分泌IL-17无影响。⑥EGCG对CIA小鼠脾细胞和淋巴结细胞Foxp3表达无影响。⑦EGCG能提高CIA小鼠脾细胞和淋巴结细胞中IB的表达，降低淋巴结细胞磷酸化IB蛋白水平的表述。
结论：①EGCG对细胞无明显毒性。②EGCG治疗CIA的免疫调节机制为抑制CIA小鼠T细胞的增殖和Th1型细胞因子IFN-γ和促炎因子TNF-α分泌；抑制以小鼠淋巴结细胞分泌IL-17；在蛋白水平上诱导CIA小鼠脾细胞和淋巴结细胞中IκB的表达，抑制淋巴结细胞IκB磷酸化，从而抑制NF-κβ的活性。
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