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丙硫咪唑能够特异性结合在微孢子虫的β 微管蛋白基因上,抑制β 微管蛋白与α 微管蛋白组装微管或使已组 装的微管解聚,使纺锥体不能形成,从而抑制细胞的有丝分裂。为了从分子生物学角度验证丙硫咪唑对家蚕微孢子 虫治疗作用的效果,阐明其药理机制,本文选用家蚕品种P50 为实验对象,采取2 种不同处理方式(1、接种家蚕微 孢子虫(Nosema bombycis) 2、接种N. bombycis后再添食丙硫咪唑),在6个不同时段(丙硫咪唑处理后6h、18h、30h、 42h、66h、90h)分别取中肠组织,以家蚕β-actin基因为内参基因进行不同样品之间mRNA量校正,分析家蚕微孢子 虫β-tubulin 基因相对表达量差异。提取中肠组织总RNA 后,检测其质量和浓度,然后去基因组DNA,再反转录成 cDNA,再用PCR检测模板质量,最后用实时荧光定量PCR检测和分析结果,建立SYBR Green实时荧光定量PCR 基因相对定量表达技术平台。结果表明:PCR 内参基因和目的基因只有特异性目的条带,溶解曲线呈单峰,无基因 组DNA污染,扩增效率在80%-120%之间,用2-△△Ct法计算得到在中肠中随着时间增长,添食丙硫咪唑的家蚕β-tubulin 基因表达量相对于只添食家蚕微孢子虫的值越来越小,在90h达到最低为0.004,抑制作用越来越明显。