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目的:建立长春新碱耐药结肠癌细胞株,初步探讨该细胞系的多药耐药的机制。
方法:长春新碱耐药结肠癌细胞株的建立通过逐步增加药物浓度方法,细胞毒实验采用MTT法,细胞周期测定采用碘化丙啶(PI)荧光染色法,P-糖蛋白(P-gp)采用流式细胞术,细胞内长春新碱(VCR)浓度采用高效液相色谱法(HPLC),多药耐药相关基因的表达采用RT-PCR方法。
结果:HCT-8/VCR的细胞倍增时间和细胞周期与敏感细胞株HCT8相似,HCT-8/VCR对长春新碱(VCR)为19.7;对其它四种化疗药物也表现出不同的抗性,HCT-8/VCR细胞还表现P-gp(MDR1)表达增加(P<0.01)和累积VCR和DOX能力增强(P<0.01),但MRP1表达没有变化。
结论:建立一株可获得药物浓度(2 000 ng/ml)的VCR产生耐药的结肠癌细胞株HCT-8/VCR,其机制为P-gp过量表达导致的细胞外排活性增强有关。该细胞株可用于以P-gp为靶点的多药耐药逆转剂的研究。