【摘 要】
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基于生物信息学对胎贝抗凝血肽进行生物制备及其活性机制研究,采用BLAST-2.3.0+本地软件将胎贝序列与Biopep等数据库中凝血肽序列进行多序列比对分析,筛选出抗凝血活性序列为：GPRG、DEE、GPRGPA、KREE、GPGG等共19条.在生物信息比对及分析预测的基础上,根据酶切割肽键的特异性,选用胃蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶对贻贝蛋白进行定向酶解制备目标肽.通过测定样品对凝血酶活性的影响
【机 构】
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哈尔滨工业大学食品科学与工程系 哈尔滨150090 大连工业大学食品学院 辽宁大连116034;国
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基于生物信息学对胎贝抗凝血肽进行生物制备及其活性机制研究,采用BLAST-2.3.0+本地软件将胎贝序列与Biopep等数据库中凝血肽序列进行多序列比对分析,筛选出抗凝血活性序列为：GPRG、DEE、GPRGPA、KREE、GPGG等共19条.在生物信息比对及分析预测的基础上,根据酶切割肽键的特异性,选用胃蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶对贻贝蛋白进行定向酶解制备目标肽.通过测定样品对凝血酶活性的影响计算样品对凝血酶的抑制率,通过pH-stat法测定水解度,筛选出有效释放贻贝抗凝血肽的关键酶种类并优化其工艺参数,确定最佳酶解条件为胰蛋白酶,料液比1∶3,温度45℃,加酶量4％,酶解2h,pH =8.5.此时水解度为15.85％,得到凝血酶抑制活性为16.2 ATU,通过Q-Taf鉴定出其活性序列包含GP、DEE、GPGG,与生物信息预测结果相吻合.综上所述,本研究以跆贝蛋白为原料,采用生物信息与酶法水解相结合,从两个角度确定贻贝抗凝血序列,为贻贝抗凝血肽研究及活性肽序列测定提供了新的思路和理论依据,为贻贝抗凝血活性肽的产业化应用奠定了基础.
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