目的意义:α-芋螺毒素TxID是本实验室从织锦芋螺(Conus textile)中发现的,能选择性阻断大鼠α3β4乙酰胆碱受体(nAChR),其半阻断浓度仅为12.5 nM。而α-芋螺毒素[S9A]TxID是芋螺毒素TxID的第9位突变体,能够区分α3β4和α6/α3β4nAChRs这两个极其相似的亚型,其对α3β4nAChR的阻断活性比对α6/α3β4nAChR的强46倍,具有很好的应用前景。多肽类化合物在生物体内的稳定性较差,半衰期短,生物利用度低,这些缺点限制了多肽药物的开发利用,[S9A]TxID也不例外。因此,本研究通过环化的方式对[S9A]TxID进行结构改造与优化,期望获得能保持原活性、且在体内代谢稳定性提高的环化突变体。方法:利用酸敏感2-氯三苯甲基氯树脂设计合成一段N→C端氨基酸序列接头,通过Fmoc固相合成法合成[S9A]TxID的线性树脂肽。使用1%三氟乙酸(TFA)和二氯甲烷(DCM)溶剂切割树脂释放出线性肽。然后利用HATU和DIEA试剂使线性肽经脱水缩合反应形成首尾环化肽,并用切割液去除环肽的侧链保护基团。最后在碳酸氢铵缓冲液中自由氧化折叠,形成两对二硫键,并通过分析型和半制备型高效液相色谱进行分离纯化和鉴定。结果:经过环化合成反应后,通过高效液相色谱和质谱鉴定,成功获得了[S9A]TxID的环肽突变体。