【摘 要】
：
选取饲养环境条件一致的海兰褐蛋鸡10只，在240日龄时分别采集心、肝、脾、肺、肾、卵巢、输卵管、脑组织和胸腺，迅速收集并置于液氮中冷冻，-80℃保存样品待用。所采组织样用Trizol法提取总RNA，经琼脂糖凝胶电泳检测，并测定浓度，-80℃保存以备反转录。按照试剂盒说明书提供步骤进行RNA反转录，合成DNA。根据NCBIGenBank中已收录的鸡LIF基因DNA序列(NCBI Reference
【机 构】
：
吉林农业大学动物科技学院,吉林长春130118
论文部分内容阅读
选取饲养环境条件一致的海兰褐蛋鸡10只，在240日龄时分别采集心、肝、脾、肺、肾、卵巢、输卵管、脑组织和胸腺，迅速收集并置于液氮中冷冻，-80℃保存样品待用。所采组织样用Trizol法提取总RNA，经琼脂糖凝胶电泳检测，并测定浓度，-80℃保存以备反转录。按照试剂盒说明书提供步骤进行RNA反转录，合成DNA。根据NCBIGenBank中已收录的鸡LIF基因DNA序列(NCBI Reference Seguence:NC-006102.3)设计一对特异引物:上游引物5-GGTGAGGATTGGGCAGAAAC-3、下游引物5-CAACCCTACACGGGACAGATT-3;以GAPDH基因为内标，上游引物:5-ATGGCATCCAAGGAGTGA-3、下游引物:5-GGGAGACAGAAGGGAACAG-3 ,用半定量RT-PCR检测LIF基因在海兰褐鸡9种不同组织的mRNA表达水平差异。通过ImageJ2x软件分析RT-PCR产物灰度值，各组织mRNA的相对表达量用每个样品mRNA的表达量与内参基因GAPDH mRNA的表达量的比值表示。结果表明，扩增获得了鸡LIF基因片段长度为496 bp,GAPDH基因扩增片段长度为141bp。海兰褐蛋鸡在240日龄时的心、肝、脾、肺、肾、卵巢、输卵管、脑和胸腺组织中均有表达。相对表达量依次是0.0609、0.0537、1.5483、0.8186、0.3067、0.1025 、0.4275、0.6163、0.2827。其中，在脾脏中的LIFmRNA表达水平最高，其次是肺脏，在心、肝脏、卵巢组织中的mRNA表达水平相对较低。此表明，鸡LIF基因mRNA在体内组织分布较广、表达水平不均匀。
其他文献
本文利用四川山地乌骨鸡出生后1,14.28,42,56,70 d和84日龄时颈静脉放血后，取胸肌、腿肌、肝脏和心组织，立即置于液氮中速冻，-70℃保存，备用。每个时间点各取6个个体(公母各半)，同时进行生产性能测定。根据鸡CAPNl基因cDNA序列(FJ232589)，采用。ligo6.0软件设计引物，用Beta-actin作为内参基因，进行定量PCR研究。将胸肌、腿肌、心和肝脏组织中CAPNl基
试验鸡群来自安徽省农科院畜牧所试验鸡场饲养的黄山黑鸡共计125只，翅下静脉采血抗凝后使用酚氯仿法抽提总DNA。根据王晓亮等(2010)的研究合成引物进行PCR扩增，上游引物序列为:GCATCACCTGTGGTGT-GGT，下游引物序列为:CATGGTTGGCTTCTCCAACT。扩增后的产物用Bsrj内切酶65℃酶切12小时，琼脂糖电泳检测酶切产物，分析其基因型。计算该群体T329S位点基因型频率
以安徽省4个地方家禽品种(群体)皖南三黄鸡60个，五华鸡120个，淮北麻鸡60个，淮南麻黄鸡308个，共计548个个体为样品。采集血样使用酚氯法抽提总DNA。根据Uemoto等(2009)的研究合成引物对OCX-32基因第4外显子进行PCR扩增，扩增产物使用限制性内切酶NcoI进行分析。利用软件POPGEN(Version1.31)计算OCX-32基因第4外显子在4个群体中的遗传多样性，利用一般线
试验所用金定鸭来自国家水禽种质资源基因库(泰州)。根据GenBank上公布的鸭RIG-I序列设计引物，利用RT-PCR克隆鸭RIG-I基因CDS区，根据保守结构域预测结果，构建携带6*his组氨酸标签的不同结构域缺失突变体的真核表载体(RIG-I-Full,RIG-I-N和RIG-I-C)，转染鸡胚成纤维细胞DF1，经RT-PCR、间接免疫荧光方法鉴定重组质粒在细胞中转录与表达;同时利用RT-qP
选取不同饲料转化率、遗传背景相同且发育正常的120日龄崇仁麻鸡肠样品，进行总RNA的提取，反转录合成cDNA。采用Primer Premier 5.0软件设计特异性引物，实时荧光RT-PCR，每个样品2个重复，根据Ct值以及相应标准品的浓度制作标准曲线。用SPASS 17.0统计软件分析数据，采用t检验和单因素方差分析(one-way ANOVA)进行差异显著性检验，计算出样品中基因PepTlmR
选取同批出雏金定鸭(无母源抗体)，由国家级水禽种质资源基因库(泰州)提供，3日龄时选取体重相当，精神状态较好的80只雏鸭，即试验组(40只)、对照组(40只)。试验组注射0.4mL(0.5mg/mL)PolyI:C，对照组注射0.4mL生理盐水，隔离饲养，分别于0，4,8,12,24,36,48,72,96h分不同时间点采集胸腺、肝脏、脾脏、肺、肾脏等组织样(其中对照组脾脏取两份样品，一份用于基因
本次实验采用如皋鸡品种，分别在2,4,6,8,10,12周龄，屠宰6只雌性如皋母鸡采集腿肌样品。用HPLC方法分析肌苷酸含量。根据标准曲线测定样品IMP含量，结果使用SPSS16.0统计分析。部分腿肌样品进行RNA抽提和芯片杂交试验。芯片数据采用Gene Spring Software 11.5.1进行归一化处理，标准化后的数据筛选FC≥2的差异表达基因。基于KEGG数据库整合分析IMP代谢网络，
以白番鸭为父本，M18、大型、中型和小型4个母本种鸭为母本，每个亲本及其杂交后代半番鸭各100120只，共9001 180只。饲养至70日龄，每组选取平均体重6只供屠宰实验，每组随机采血40只。选用了8个微卫星引物作为实验位点。用8％变性聚丙烯酞胺凝胶电泳检测，电泳结束后银染显色、分型。根据遗传距离公式计算出各亲本间的奈氏遗传距离(DA)，其中番鸭♂×M18♀的遗传距离最大，其次为番鸭♂×中型♀、
选取饲养条件环境条件一致的海兰褐蛋鸡50只，在240日龄时分别采集心、肝、脾、肺、肾、卵巢、输卵管和脑组织，迅速收集并置于液氮中冷冻，-80℃保存样品待用。所采组织样用Trizol法提取总RNA，经琼脂糖凝胶电泳检测，并测定浓度，-80℃保存以备反转录。反转录反应按照试剂盒说明书进行合成cDNA。根据NCBI GenBank中已发表的鸡Slic2基因组序列，用Primer 5.0引物设计软件设计所
选用海兰褐蛋鸡为实验材料，饲养在山东农业大学动物科技学院试验鸡场，随机选取3只成年鸡，采集下丘脑、心、肝、脾、肺、’肾、腺胃、肌胃、胰脏、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、胸肌、腿肌、卵巢、腹脂等17种组织，放于液氮中速冻后转至一80℃低温冰箱保存备用。根据CLOCK基因mRNA序列设计特异性引物，使用TRIZOL法提取所采集的17种组织的总RNA。以反转录所得cDNA为模板，进行RT-PCR，检测蛋鸡