L型钙离子通道Cav1.2在牙髓干细胞分化中的作用研究

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目的:观察L型钙离子通道(L-type calcium channel,LTCC)cav1.2及其羧基末端(Distal Cterminus,DCT)对大鼠牙髓干细胞(Rat dental pulp stem cells,rDPSCs)分化的影响。方法:通过特殊培养液诱导大鼠牙髓干细胞向成牙本质细胞和神经细胞方向分化。首先利用L型钙离子通道阻滞剂尼莫地平(Nimodipine)在牙髓干细胞分化过程中阻断LTCC,应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR),Western Blot和细胞免疫荧光染色检测LTCC对分化的影响;然后进一步应用RNA干扰(shRNA)技术使rDPSCs的Cav1.2基因沉默后,分别进行诱导分化,应用qRT-PCR,Western Blot和细胞免疫荧光染色检测Cav1.2及其羧基末端在分化前后的变化。结果:大鼠牙髓干细胞可以分化为成牙本质细胞和神经样细胞,并表达相应的特异性标志物。而应用尼莫地平阻断L型钙离子通道以及应用Cav1.2-shRNA干扰细胞均对牙髓干细胞的分化起到显著的抑制作用。和正常分化组相比,向成牙本质细胞分化后,其钙化结节,ALP以及DSPP的表达均降低,向成神经分化后特异性标志物MAP-2和β-Ⅲ-tubulin也明显减少。并且观察到羧基末端在牙髓干细胞分化前后有较明显的变化,在牙髓干细胞向成牙本质细胞方向分化后,Car1.2羧基末端在分化后的细胞中含量减少,而在神经细胞样细胞方向分化后的细胞中含量明显增高(P<0.05,n=9)。结论:本实验发现阻断L型钙离子通道Cav1.2会抑制牙髓干细胞向成牙本质细胞方向和神经细胞样细胞方向分化,证实LTCC尤其是Cav1.2对大鼠牙髓干细胞的分化具有重要的作用,并且这个作用过程可能受到DCT表达量的调控。
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