【摘 要】
：
目的：预测猪链球菌2型(SS2)溶菌酶释放蛋白(MRP)的B细胞表位，并分析其免疫学特性。方法：运用ANTHEPROT 5.0综合分析二级结构、亲水性、表面可及性与抗原性指数，预测MRP的B细胞优势表位簇；PCR扩增出表达预测的抗原肽段的基因(mrp-1)，构建重组原核表达载体pET32a-mrp-1，IPTG诱导表达，以渗透性休克法纯化重组蛋白；使用重组蛋白免疫血清和灭活SS2免疫血清Weste
【机 构】
：
山东省滨州畜牧兽医研究院，山东滨州 256600 华中农业大学动物医学院，湖北武汉 430070
论文部分内容阅读
目的：预测猪链球菌2型(SS2)溶菌酶释放蛋白(MRP)的B细胞表位，并分析其免疫学特性。方法：运用ANTHEPROT 5.0综合分析二级结构、亲水性、表面可及性与抗原性指数，预测MRP的B细胞优势表位簇；PCR扩增出表达预测的抗原肽段的基因(mrp-1)，构建重组原核表达载体pET32a-mrp-1，IPTG诱导表达，以渗透性休克法纯化重组蛋白；使用重组蛋白免疫血清和灭活SS2免疫血清Western blot检测重组蛋白的免疫原性及其与SS2免疫血清的反应性；纯化的重组蛋白免疫雌性SPF昆明小鼠，SS2攻毒受试动物评估重组蛋白对小鼠的免疫保护力。结果：Western blot显示预测的95 0～1210aa肽段与PET32a重组表达的蛋白(MRP)具有良好的免疫原性和反应性；攻毒试验结果表明重组蛋白对小鼠的免疫保护率为菌体免疫所提供保护率的66.7％。结论：本研究为利用该细胞表位簇作为高效免疫制剂奠定了基础。
其他文献
去甲肾上腺素(norepinephrine，NE)作为人的一种应激激素，对包括弯曲菌在内的多种病原细菌具有促生长和毒力增强的作用，而弯曲菌是许多西方国家引起起人肠炎的主要病原。最近，我们发现肠菌素受体CfrA参与NE对弯曲菌的促生长活性，但是其中的作用机制尚不清楚。在本试验中，将弯曲菌加入MH培养基在缺铁环境下观察NE的促生长活性，进而通过改变铁螯合剂DFO浓度、NE浓度和细菌接种剂量等指标筛选N
为制备和标定猪瘟病毒阴、阳性血清国家参照品(兔体中和试验)，本试验制备了猪瘟病毒阴性、弱阳性和强阳性血清，通过过滤、分装，冻干、熔封，获得3亚批候选物，并进行了检验、协作标定和定值。结果显示：物理性状、无菌检验、安全检验，支原体检验、真空度测定均合格；剩余水分均小于4%：均匀性检验用f检验和，检验显示，各组测定数据的均值与方差无显著差异(a=0.05)；特异性检验结果均为口蹄疫，伪狂犬病、猪繁殖与
猪高热综合征(PHFS)每年给中国的养猪业造成了巨大的经济损失，PHFS的病原有很多种，如PCV-2、PRRSV、APP和链球菌等。本项目研究的目的是分析猪瘟病毒在中国猪高热综合征病例中的作用。本项目对采自2007～2009年期间的1 3个规模化猪场的733份血清和47份组织样品进行猪瘟抗体水平监测或疑似PHFS诊断。因中国对猪瘟采取强制性免疫，大部分猪(95%以上)的猪瘟抗体为阳性，检测猪瘟抗体
根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV2)全基因序列设计引物，从疑似患断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)的仔猪组织病料中分别扩增出PCV2的全基因，将全基因克隆并测序。根据PCV2 ORF2序列设计引物，扩增HN01株ORF2基因序列，克隆入真核表达载体pEGFP-N1。通过脂质体介导法转染细胞，观察表达产物的荧光情况。结果表明，成功从疑似PMws病料中扩增出PcV2全基因序列，与GenBa
目的：本研究拟构建检测猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)病原的二重液相芯片(Diplex xMAP Array)检测方法，为常见猪病的快速高通量鉴别诊断搭建新技术平台。方法：根据GenBank中公布的PPV结构蛋白VP2的基因及PCV2全基因序列，用DNAman V6进行多序列比对分析，筛选出保守区后用Beacon Designer’7.9设计出PPV和PCV2的特异性探针、5I物及
本研究对已发表的戊型肝炎病毒(HEV)不同基因型毒株全序列进行分析，针对ORF3的保守区设计引物和探针优化建立了HEV荧光RT-PCR检测体系。分析表明该反应体系具有良好的扩增效率、特异性和稳定性，且检测灵敏度比普通RT-PCR方法高1 0—100倍.利用所建立的荧光定量PCR方法对采集自浙江省及其周边上海、江苏等地区规模化猪场的样品以及HEV抗体阳性人血清样品进行了HEV核酸检测.其中，77份人
目的：探讨LPB—ELISA抗体滴度评价口蹄疫疫苗效力的效果。方法：建立疫苗免疫LPB—ELISA抗体滴度与攻毒结果的二项Logistic模型和ROC曲线，分别确定预测保护率和抗体阈值，计算平均预测保护率和抗体阳性率，进而推断PD50，与金标准进行比较。结果：当样本数n=15时，平均预测保护率与抗体阳性率估计PD50，相对误差(Er)达到1 5％～40％；当样本数增加一倍时，抗体阳性率计算的PD5
提高国内Ⅰ群禽腺病毒疫苗的防控能力，控制Ⅰ群禽腺病毒蔓延。优化I群禽腺病毒的增殖条件，以Ⅰ群禽腺病毒血清4型(FAV-4)及血清8型(FAV-8)的抗原液制备油乳剂单价及双价灭活苗，并检验疫苗性状、监测免疫抗体水平及进行免疫攻毒试验和田间试验.3种疫苗均为白色状乳液，4℃下保存期均可达12个月，单价疫苗的最小免疫剂量为100μL／羽，双价疫苗的最小免疫剂量为250μL／羽；免疫抗体水平监测结果表明
本试验通过重组表达的方法获得具有生物学活性的金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶LyK。以噬菌体cDNA为模板，通过PCR扩增获得编码LyK的DNA，将其定向克隆至表达载体pET-15b中，构建重组表达载体pET-1 5b-LyK，将pET-15b—LyK转入BL21(Codon Plus)进行表达。经Ni柱纯化后检测其抗茵活性。结果表明，噬菌体裂解酶对金黄色葡萄球菌(包括MRSA)均有明显的裂解活性，并且
为建立评价流产布鲁氏菌疫苗株免疫保护力的小鼠模型，选取4～6周龄雌性BALB／c小鼠为实验动物，设置A19免疫组(n=50)和非免疫对照组(n=70)。A19免疫组腹腔接种小鼠A19 5×104CFU，非免疫对照组接种PBS液0.2mL。45d后，非免疫对照组设为攻毒组与PBS对照组，其余小鼠都以3×104CFU剂量的2308株攻击小鼠，攻毒后第15d和45d天分别剖杀小鼠，取小鼠脾脏称重、细菌分