目的：建立玫瑰孢链霉菌发酵液中达托霉素和A21978C组分的含量测定方法。方法：以达托霉素为对照品，采用高效液相色谱法进行测定。色谱条件为色谱柱ShimadzuVP-ODS（250×4.6mm，5.0μm）;梯度洗脱的流动相A:乙腈-0.05MpH7.2的磷酸缓冲液（30:70），流动相B:乙腈-0.05MpH7.2的磷酸缓冲液（70:30）;流速1.0mL·min-1;检测波长为223nm，260nm，280nm，360nm结果达托霉素和A21978C各组分之间完全分离，3个不同浓度的对照品溶液分别连续6次进样，峰面积的RSD≤0.3％;在0.55～22.00μg·mL-1的范围内，浓度（X）与峰面积（Y）具有良好的线性关系（r=0.9999），回归方程为：Y=0.4561X＋0.0332;平均加样回收率为98.5％（RSD2.3％，n=9）;检测限和定量限均为6.6ng（0.33μg·mL-1）。结论：该方法灵敏准确，重现性好，适合于玫瑰孢链霉菌发酵液中达托霉素及A21978C组分的含量测定。