生姜腐皮镰刀菌的分离鉴定及PCR快速检测方法构建

来源 :病虫防护与生物安全——中国植物保护学会2021年学术年会论文集 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gaolch014
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生姜(Zingiber officinale Roscoe)是重要的药食同源蔬菜,富含姜辣素等多种活性物质,具有杀菌、消炎、抗肿瘤等功效。但生姜生产过程中易受多种病原菌的侵染,其中由腐皮镰刀菌(Fusarium solanni)、尖孢镰刀菌(F.oxysporum)以及少数假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)引起的生姜枯萎病是一种最常见的真菌土传病害,一旦发病将导致整个田块严重减产。研究发现,带菌种姜和连作土壤是枯萎病发生的主要初侵染源,因此建立一种快速高效的PCR检测方法,检测种姜和田间土壤是否带菌,阻断带菌种姜入田并及时对病土进行消毒,对于该病害的防治至关重要。本试验通过致病力测定、形态学观测以及系统进化树分析等方法对湖北生姜产区分离的菌株进行鉴定,获得了生姜枯萎病菌之一腐皮镰刀菌(F.solani)。基于已报道的镰刀菌属通用引物TEF-1αF/TEF-1αR序列,以腐皮镰刀菌基因组DNA为模板进行扩增测序,根据获得的序列信息,设计筛选出一对腐皮镰刀菌特异性引物,构建了基于普通PCR的快速高效分子检测方法,并对接种过病菌的生姜植株和土壤进行检测验证。结果显示:通过病原菌的菌落形态、孢子显微结构观察、真菌通用引物ITS 1/ITS4鉴定和致病性测定,确定引起生姜枯萎病的病原菌为腐皮镰刀菌(F.solani),使用设计出的特异性引物F8/R8进行PCR,特异扩增获得约381bp的目标条带,检测灵敏度为454 pg/μl,利用该引物对带菌生姜幼苗和土壤进行检测验证,证实可从发病生姜幼苗和带菌土壤中特异性检测到枯萎病菌(F.solani)。本研究明确了湖北地区引起生姜枯萎病的病原菌为腐皮镰刀菌(F.solani),并且建立了一种PCR快速检测方法,该检测方法具有简便、灵敏、高效的特点,能够准确、快速地鉴定该病原菌,可用于生姜枯萎病的早期诊断与预防。
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