【摘 要】
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目的建立聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）联合等位基因特异性聚合酶链反应（AS-PCR）检测bcr/abl融合基因T315I点突变的方法，以提高bcr/abl基因T315I突变检出率。方法方法学建立。构建abl基因野生型和T315I突变型重组质粒作为检测对象，设计一对野生型和突变型abl基因序列的通用引物，分别以野生型和T315I突变型质粒作为模板，PCR扩增出目的片段，经酶切初
【机 构】
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目的建立聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）联合等位基因特异性聚合酶链反应（AS-PCR）检测bcr/abl融合基因T315I点突变的方法，以提高bcr/abl基因T315I突变检出率。
方法方法学建立。构建abl基因野生型和T315I突变型重组质粒作为检测对象，设计一对野生型和突变型abl基因序列的通用引物，分别以野生型和T315I突变型质粒作为模板，PCR扩增出目的片段，经酶切初筛检测abl基因T315I突变情况，另设计一对仅针对T315I突变的特异性引物进行AS-PCR检测。并对具有该基因突变的1例慢性粒细胞白血病患者进行检测，同时对该方法的灵敏度和特异性进行检测。
结果PCR扩增的目的片段（273 bp）经限制性内切酶DdeⅠ酶切后，野生型abl基因片段产生141、68、46和18 bp 4条片段，而T315I突变型abl基因片段酶切后产生159、68和46 bp 3条片段。PCR-RFLP方法可以检测T315I突变，检测灵敏度为6%。再以酶切产物作为模板进行AS-PCR，优化反应条件，AS-PCR所能检测到的T315I最低突变浓度为0.18%。所测临床标本结果显示，该患者发生了bcr/abl融合基因T315I突变。
结论PCR-RFLP联合AS-PCR检测方法特异性好、灵敏度高，能够给临床检测abl基因T315I突变提供一种新型的检测方法。（中华检验医学杂志,2013,36:823-827）
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