【摘 要】
：
IBV H52基因组全长27.6kb,分13个1.3~2.9kb的片段扩增H52全长cDNA,额外扩增N-3′片段,并克隆到载体PMD19-T上.利用No see′m技术在每个片段中引入BsaⅠ或BsmBⅠ酶切位点,D1片
【机 构】
：
四川大学生命科学学院、动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室、生物资源与生态环境教育部重点实验室、“985工程”西南资源环境与灾害防治科技创新平台
【基金项目】
：
现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-41-K09);国家自然科学基金(30972201)
论文部分内容阅读
IBV H52基因组全长27.6kb,分13个1.3~2.9kb的片段扩增H52全长cDNA,额外扩增N-3′片段,并克隆到载体PMD19-T上.利用No see′m技术在每个片段中引入BsaⅠ或BsmBⅠ酶切位点,D1片段中引入沉默突变位点,在5′UTR端和N-3′引入T7启动子,3′UTR端引入Poly(A)尾.将克隆好的13个片段酶切,纯化,体外无缝连接为全长cDNA.将全长cDNA及N-3′体外转录获得它们的转录体,将转录体共转染BHK-21细胞,48h后收获细胞液,将细胞液接种10日龄SPF鸡胚获得反向遗传株H52-R.在鸡胚中盲传5代后,通过RT-PCR对无义突变位点进行扩增及序列分析,在反向株H52-R中发现引入的无义突变位点.对反向株H52-R的一些生物学特性如HA、EID50等测定发现,H52-R的这些生物学特性与亲本株H52相似.
其他文献
近几年来,国家进行经济结构调整,经济出现下行态势。受产能过剩、八项规定、政务消费的限制,醉驾入刑、反四风等政策的影响,以及塑化剂等食品安全风险的加剧,白酒行业受到前
随着水下作业要求的增加以及软体机器人技术的发展,水下软体机器人的研究成为水下机器人的一个前沿方向。用人工肌肉实现驱动控制并能实现仿生运动的水下软体机器人成为相关
以混合动力电动汽车为研究对象,以驾驶员的制动意图和制动能量回收率为设计指标,基于最优控制理论设计了一套有效的制动力分配模型。仿真结果表明,该控制方法能够显著提高汽
目的分析运动康复护理联合健康宣教在老年慢性心力衰竭（CHF）患者中的应用效果。方法选取2012—2016年在自贡市第四人民医院住院治疗的CHF患者285例,采用随机数字表法分为对照组
目的探讨内膜下血管成形术(SIA)治疗长段股腘动脉硬化闭塞的临床疗效及其技术要点。方法回顾性分析2009年6月～2011年8月我院收治的20例TASCⅡC型、D型股腘动脉硬化闭塞患者的
近年来许多与疾病相关的致病基因及变异被不断发现，使得通过基因检测对复杂疾病进行早期患病风险评估与早期个性化健康干预成为可能。本文对复杂疾病的概念与特点，遗传分析