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摘要 进行RapidChek SELECET方法和GB/T13091—2002方法检测饲料中沙门氏菌的效果研究，结果表明：相同的样品采用2种方法检测出的结果完全相同，且RapidChek SELECT检测时间比GB/T13091—2002检测时间少。
关键词 RapidChek SELECET；GB/T13091—2002；饲料；沙门氏菌；检测
中图分类号 TS201.6 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2015）10-0258-02
Comparison of Detection of Salmonella in Fodder by RapidChek SELECET and GB/T 13091—2002 Method
PAZILAITI·YIMING ALITENGCAISIKE
（Veterinary Feed Monitor in Xinjiang Uygur Autonomous Region，Urumqi Xinjiang 830000）
Abstract The effects of using RapidChek SELECET and GB method to detect salmonella in fodder were done，the results showed that，the detected results were exactly the same with the same samples by 2 methods，and the detection time of RapidChek SELECT was less than that of GB/T13091-2002.
Key words RapidChek SELECET；GB/T13091-2002；fodder；salmonella；detection
RapidChek SELECT检测方法的核心是将噬菌体作为选择性试剂，噬菌体是作用于细菌的病毒，可以攻击与试剂有交叉反应的杂菌，减少假阳性结果的产生，提高检测特异性；同时噬菌体还会攻击其他竞争性细菌，为沙门氏菌快速生长营造最佳环境，提高检测的灵敏度[1-2]。
专利配方的培养基与最新的RapidChek SELECT侧向层析试纸条连用。试纸条包含一个专用沙门氏菌抗体承载板，以提高整个产品检测性能。如果只有1条质控线出现表示阴性结果；质控线和检测线都出现表示阳性结果。
1 材料与方法
1.1 试验材料
RapidChek SELECT试剂盒由罗玛实验室提供。缓冲蛋白胨水（BP）、氯化镁-孔雀绿增菌液（RV）、亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）、选择性划线固体培养基、酚红煌绿琼脂、DHL琼脂、营养琼脂、三糖铁琼脂、尿素琼脂、赖氨酸脱羧试验培养基、β-半乳糖苷酶试剂、V-P反应培养基（V-P培养基、计算溶液、a-萘酚乙醇溶液、氢氧化钾溶液）、靛基质反应培养基（胰蛋白胨色氨酸培养基、柯凡克试剂）、半固体营养琼脂、盐水溶液、沙门氏菌因子O、VI、H型血清。对照菌株：鼠伤寒沙门氏菌。供试样品：配合饲料、鱼粉、骨粉、豆粕、棉粕、牛奶精料补充料等20个饲料样品。
1.2 试验方法
2种检测方法分别见图1、2。
1.2.1 GB/T13091—2002检测步骤。非选择性增菌：每种样品称取25 g（mL）经过均质后接种到225 mL缓冲蛋白胨水中进行预增菌，（36±1） ℃培养16～20 h。选择性增菌培养：以上增菌液GB/T13091—2002标准规定接种到2种增菌液，一是亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）（36±1）℃培养18～24 h；二是四硫酸钠煌绿增菌液（TTB）42 ℃培养18～24 h。分离培养和鉴定：将样品增菌液接种到分离平板酚红煌绿（FH）、DHL琼脂，（36±1）℃培养18～24 h；阳性菌接种到XLD、显色培养基、亚硫酸铋平板上；营养琼脂（增菌）、伊红美蓝培养基接种混合菌（目的筛选大肠杆菌），血琼脂平板接种混合菌（目的筛选金葡）。对可疑菌落进行进行生化试验、血清学鉴定。
1.2.2 RapidChek SELECT检测步骤。每种样品称取25 g（mL），接种到RapidChek SELECT沙门氏菌培养基（含补充剂），在42 ℃下孵育16～22 h。取0.1 mL增菌液加入1 mL RapidChek SELECT二次培养基中，在42 ℃下孵育16～22 h。将试纸条放入待测样品中，10 min后读取结果（1条线为阴性，2条线为阳性）。挑选出阳性样品进行血清学鉴定和生化试验[3-4]。
2 结果与分析
由表1、图3、图4可知，所供试验样中，相同的样品采用GB/T13091—2002和RapidChek SELECT方法检测出的结果完全相同。结果显示，RapidChek SELECT检测时间至少比GB/T13091—2002检测时间少24 h。
3 结论与讨论
试验结果表明，采用2种检测方法检测出的结果一致，且RapidChek SELECT检测时间少于GB/T13091—2002检测时间。
RapidChek SELECT检测特点是在初级培养基中加入噬菌体，提高了检测的特异性和灵敏度，节省了时间。RapidChek SELECT 不仅省时、方便、灵敏、假阳性较少，而且价格适中。目前还有酶联免疫测试技术、荧光抗体检测技术、乳胶凝集实验、抗血清凝集技术、快速酶触反应及代谢产物的检测等快速检测沙门氏菌的方法还是使用的GB/T13091—2002的检测方法，这些应用了分子生物、生物化学、免疫学等一些尖端科学的方法能否适用于国家检测标准还需要不断论证和试验，随着我国的检测手段不断地提高，有更多、更快、更准确的方法运用到实际检测中去，以提供更科学、更精确的数据[5-7]。
4 参考文献
[1] 王毳，闫磊，曾庆祝.沙门氏菌的检测技术与方法[J].现代食品科技，2007（5）：82-85.
[2] 马孟根，王红宁，余勇，等.猪源致病性沙门氏菌耐药基因的分析[J].畜牧兽医学报，2006（1）：65-70.
[3] 曾晓芳.畜产品中沙门氏菌污染的检测与控制[J].四川畜牧兽医，2003（4）：28-29.
[4] 文其乙，焦新安.直接ELISA检测沙门氏菌方法的建立及其应用研究[J].中国兽医学报，1995（2）：105-111.
[5] 黄金林，焦新安，文其乙，等.应用聚合酶链反应快速检测沙门氏菌[J].扬州大学学报：农业与生命科学版，2002（3）：4-7.
[6] 邵碧英，陈彬，汤敏英，等.沙门氏菌多重PCR检测方法的建立[J].食品科学，2007（10）：489-492.
[7] 张河战，辜清吾.沙门氏菌的分类、命名及中国沙门氏菌菌型分布[J].微生物学免疫学进展，2002（2）：74-76.
关键词 RapidChek SELECET；GB/T13091—2002；饲料；沙门氏菌；检测
中图分类号 TS201.6 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2015）10-0258-02
Comparison of Detection of Salmonella in Fodder by RapidChek SELECET and GB/T 13091—2002 Method
PAZILAITI·YIMING ALITENGCAISIKE
（Veterinary Feed Monitor in Xinjiang Uygur Autonomous Region，Urumqi Xinjiang 830000）
Abstract The effects of using RapidChek SELECET and GB method to detect salmonella in fodder were done，the results showed that，the detected results were exactly the same with the same samples by 2 methods，and the detection time of RapidChek SELECT was less than that of GB/T13091-2002.
Key words RapidChek SELECET；GB/T13091-2002；fodder；salmonella；detection
RapidChek SELECT检测方法的核心是将噬菌体作为选择性试剂，噬菌体是作用于细菌的病毒，可以攻击与试剂有交叉反应的杂菌，减少假阳性结果的产生，提高检测特异性；同时噬菌体还会攻击其他竞争性细菌，为沙门氏菌快速生长营造最佳环境，提高检测的灵敏度[1-2]。
专利配方的培养基与最新的RapidChek SELECT侧向层析试纸条连用。试纸条包含一个专用沙门氏菌抗体承载板，以提高整个产品检测性能。如果只有1条质控线出现表示阴性结果；质控线和检测线都出现表示阳性结果。
1 材料与方法
1.1 试验材料
RapidChek SELECT试剂盒由罗玛实验室提供。缓冲蛋白胨水（BP）、氯化镁-孔雀绿增菌液（RV）、亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）、选择性划线固体培养基、酚红煌绿琼脂、DHL琼脂、营养琼脂、三糖铁琼脂、尿素琼脂、赖氨酸脱羧试验培养基、β-半乳糖苷酶试剂、V-P反应培养基（V-P培养基、计算溶液、a-萘酚乙醇溶液、氢氧化钾溶液）、靛基质反应培养基（胰蛋白胨色氨酸培养基、柯凡克试剂）、半固体营养琼脂、盐水溶液、沙门氏菌因子O、VI、H型血清。对照菌株：鼠伤寒沙门氏菌。供试样品：配合饲料、鱼粉、骨粉、豆粕、棉粕、牛奶精料补充料等20个饲料样品。
1.2 试验方法
2种检测方法分别见图1、2。
1.2.1 GB/T13091—2002检测步骤。非选择性增菌：每种样品称取25 g（mL）经过均质后接种到225 mL缓冲蛋白胨水中进行预增菌，（36±1） ℃培养16～20 h。选择性增菌培养：以上增菌液GB/T13091—2002标准规定接种到2种增菌液，一是亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）（36±1）℃培养18～24 h；二是四硫酸钠煌绿增菌液（TTB）42 ℃培养18～24 h。分离培养和鉴定：将样品增菌液接种到分离平板酚红煌绿（FH）、DHL琼脂，（36±1）℃培养18～24 h；阳性菌接种到XLD、显色培养基、亚硫酸铋平板上；营养琼脂（增菌）、伊红美蓝培养基接种混合菌（目的筛选大肠杆菌），血琼脂平板接种混合菌（目的筛选金葡）。对可疑菌落进行进行生化试验、血清学鉴定。
1.2.2 RapidChek SELECT检测步骤。每种样品称取25 g（mL），接种到RapidChek SELECT沙门氏菌培养基（含补充剂），在42 ℃下孵育16～22 h。取0.1 mL增菌液加入1 mL RapidChek SELECT二次培养基中，在42 ℃下孵育16～22 h。将试纸条放入待测样品中，10 min后读取结果（1条线为阴性，2条线为阳性）。挑选出阳性样品进行血清学鉴定和生化试验[3-4]。
2 结果与分析
由表1、图3、图4可知，所供试验样中，相同的样品采用GB/T13091—2002和RapidChek SELECT方法检测出的结果完全相同。结果显示，RapidChek SELECT检测时间至少比GB/T13091—2002检测时间少24 h。
3 结论与讨论
试验结果表明，采用2种检测方法检测出的结果一致，且RapidChek SELECT检测时间少于GB/T13091—2002检测时间。
RapidChek SELECT检测特点是在初级培养基中加入噬菌体，提高了检测的特异性和灵敏度，节省了时间。RapidChek SELECT 不仅省时、方便、灵敏、假阳性较少，而且价格适中。目前还有酶联免疫测试技术、荧光抗体检测技术、乳胶凝集实验、抗血清凝集技术、快速酶触反应及代谢产物的检测等快速检测沙门氏菌的方法还是使用的GB/T13091—2002的检测方法，这些应用了分子生物、生物化学、免疫学等一些尖端科学的方法能否适用于国家检测标准还需要不断论证和试验，随着我国的检测手段不断地提高，有更多、更快、更准确的方法运用到实际检测中去，以提供更科学、更精确的数据[5-7]。
4 参考文献
[1] 王毳，闫磊，曾庆祝.沙门氏菌的检测技术与方法[J].现代食品科技，2007（5）：82-85.
[2] 马孟根，王红宁，余勇，等.猪源致病性沙门氏菌耐药基因的分析[J].畜牧兽医学报，2006（1）：65-70.
[3] 曾晓芳.畜产品中沙门氏菌污染的检测与控制[J].四川畜牧兽医，2003（4）：28-29.
[4] 文其乙，焦新安.直接ELISA检测沙门氏菌方法的建立及其应用研究[J].中国兽医学报，1995（2）：105-111.
[5] 黄金林，焦新安，文其乙，等.应用聚合酶链反应快速检测沙门氏菌[J].扬州大学学报：农业与生命科学版，2002（3）：4-7.
[6] 邵碧英，陈彬，汤敏英，等.沙门氏菌多重PCR检测方法的建立[J].食品科学，2007（10）：489-492.
[7] 张河战，辜清吾.沙门氏菌的分类、命名及中国沙门氏菌菌型分布[J].微生物学免疫学进展，2002（2）：74-76.