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目的：制备ＮＡＤ亲和胶，用于分离纯化２，５－二酮基－Ｄ－葡萄糖酸还原酶，方法：将ＮＡＤ通过丁二酸二酰肼与溴化氰活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６ＭＢ胶联结，制香ＮＡＤ亲和胶，从棒杆菌细胞中取的２，５－二酮基－Ｄ－葡萄糖酸还原酶粗酶液用ＮＡＤ亲和胶进行亲和层析纯化。结果：ＮＡＤ的结合率为７１．６７％；亲和层析回收率为７７．２７％；酶的比活提高了１．１倍。结论：以ＮＡＤ为配基的亲和胶用于纯化以ＮＡＤＰＨ为辅酶