【摘 要】
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目的探讨白细胞介素6(IL-6)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)自噬和凋亡的影响,以及自噬与凋亡的相互作用。方法用5、10、20、50 ng/m L IL-6诱导体外培养的HUVECs 24 h。CCK-8法
【机 构】
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重庆医科大学附属第一医院急诊科; 重庆市中医院重症医学科;
【基金项目】
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国家自然科学基金(81202318)~~
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目的探讨白细胞介素6(IL-6)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)自噬和凋亡的影响,以及自噬与凋亡的相互作用。方法用5、10、20、50 ng/m L IL-6诱导体外培养的HUVECs 24 h。CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡变化,单丹磺酰戊二胺(MDC)染色观察细胞嗜酸性自噬泡情况,透射电镜观察细胞超微结构的变化,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白cleaved caspase-3和自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3)、p62的表达水平。采用IL-6分别联合自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)或自噬诱导剂西罗莫司(SRL)处理HUVECs,观察细胞增殖、凋亡情况及相关蛋白的表达变化。结果与对照组相比,IL-6浓度依赖性降低HUVECs的存活率和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值(P<0.05),增加细胞凋亡和cleaved caspase-3、p62的表达(P<0.05),细胞内自噬泡减少(P<0.05),且自噬小体明显减少。与IL-6刺激组相比,IL-6联合应用3-MA诱导HUVECs可进一步抑制HUVECs的自噬水平,细胞内自噬泡和自噬小体数目减少(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.05),p62表达增加(P<0.05),细胞cleaved caspase-3表达和凋亡增加(P<0.05)。与IL-6刺激组相比,IL-6联合应用SRL处理HUVECs可以抑制IL-6诱导的细胞自噬水平下降,细胞内自噬泡和自噬小体数目增多(P<0.05),细胞内LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05),p62表达下降(P<0.05),cleaved caspase-3表达和细胞凋亡水平下降(P<0.05)。结论 IL-6可通过抑制自噬促进HUVECs的凋亡。
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