【摘 要】
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目的 探讨二十二碳六烯酸(DHA)激活正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BK通道)的机制.方法 采用酶消化法急性分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞;全细胞膜片钳实验
【机 构】
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214023,南京医科大学附属无锡市人民医院心内科徐州医学院药理学系;
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目的 探讨二十二碳六烯酸(DHA)激活正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BK通道)的机制.方法 采用酶消化法急性分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞;全细胞膜片钳实验技术记录正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流;膜内向外型单通道膜片钳实验技术记录不同钙离子浓度条件下BK通道电流,并计算开放概率(NP0);钙离子成像技术测定不同浓度DHA作用后及分别采用磷脂酶(CPLC)受体抑制剂和三磷酸肌醇(IP3)受体抑制剂预孵育冠状动脉平滑肌细胞后细胞内钙离子浓度变化.结果 1 μmol/L DHA可激活BK通道;在刺激电位60 mV,电极外液钙离子浓度为0、0.01、0.1、1、3、10、50和100 μmol/L条件下,BK通道NP0分别为0.0027±0.0004、0.0060±0.001 4、0.0972±0.0106、0.137 9±0.032 9、0.468 7±0.163 7、2.097 1±0.3104和3.120 4±0.242 7(P ＜0.05,n=4).未加DHA时,细胞内钙离子浓度荧光信号比值(R值)为0.51±0.01;加入0.001和0.01 μmol/L DHA后,R值分别为0.53±0.02和0.55±0.01,与未加DHA相比差异无统计学意义(P ＞0.05,n≥5);当加入的DHA浓度为0.1、0.3、1、3、5和10 μmol/L时,其R值分别为0.64±0.01、0.65±0.01、0.70±0.01、0.69±0.01、0.68±0.01和0.67 ±0.02,EC50为(0.04±0.02) μmol/L,与未加DHA比较,差异有统计学意义(P＜0.05,n≥4).分别采用PLC受体抑制剂U73122和IP3受体抑制剂2-APB预孵育冠状动脉平滑肌细胞,测定加入0.1μmol/L DHA后R值分别为0.52±0.01和0.49±0.02,低于未加抑制剂的R值(0.64±0.01,P＜0.05,n≥4).结论 DHA可通过PLC-IP3-Ca2+途径增加正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞内钙离子浓度激活BK通道,从而扩张血管,对心血管系统有一定的保护作用.
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