探讨cyclin D1过表达对子宫颈鳞癌SiHa细胞增殖、分化的影响及其他信号分子的变化情况。
方法采用PCR法扩增cyclin D1基因全长，构建cyclin D1-pcDNA3.1质粒转染人乳头状瘤病毒16阳性的SiHa细胞，筛选cyclin D1稳定过表达细胞株。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western blot分别检测转染细胞cyclin D1 mRNA和蛋白表达。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法绘制细胞生长曲线，采用RT-PCR法和Western blot检测转染细胞CK7、E-cadherin、波形蛋白、Snail基因的mRNA和蛋白表达；采用RT-PCR法检测增殖分化相关基因CDK4、CDK2、p21、p27、cyclin E、Rb、E2F、E6/E7、Ki-67基因的mRNA表达水平。对细胞同步化处理，用RT-PCR法检测细胞周期不同时间点cyclin D1及p21基因的mRNA表达情况。
结果成功构建cyclin D1稳定过表达的G-3细胞株。生长曲线及Ki-67 mRNA升高(P<0.05)提示G-3细胞增殖速度加快，G-3细胞中波形蛋白、Snail基因和蛋白表达明显增加(均P<0.05)，E-cadherin、CK7基因和蛋白表达明显降低，提示转染细胞发生了上皮间质转化。cyclin D1过表达后，CDK4、CDK2、p21、p27、cyclin E表达增加，Rb、E2F、E6/E7、p16表达无明显改变，p21与cyclin D1表达趋势基本一致，在细胞周期不同时间点表达存在波动性。
结论转染诱导cyclin D1过表达可促进SiHa细胞增殖和上皮间质转化，这一过程中伴随着CDK4、CDK2、p21、p27、cyclin E基因表达的上调。cyclin D1过表达时，p21表达量也增高，可能通过影响波形蛋白表达参与了对SiHa细胞上皮间质转化的调控。